2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  阿薩希毛孢子菌(Trichosporon asahii,T.asahii)是一種酵母樣真菌,可導致侵襲性、播散性感染。T.asahii導致的播散性毛孢子菌病,致死率高達80%。T.asahii感染人體的結(jié)局,主要與宿主的免疫防御狀態(tài)和菌株對抗真菌藥物敏感性這兩方面因素有關(guān)。本研究應用人全基因組寡核苷酸芯片檢測了人THP-1單核細胞與T.asahii體外相互作用3小時后的基因表達譜變化,有助于理解宿主單核細胞對T.asa

2、hii感染的免疫防御機制。
  研究表明,單核細胞的吞噬功能明顯弱于巨噬細胞,而單核細胞只占外周血白細胞總數(shù)的3%-8%,這可能是其難以抵擋T.asahii入侵,導致血源性、播散性感染的原因之一。粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(Granulocyte-MacrophageColony-Stimulating Factor,GM-CSF)作為一種重要的集落刺激因子,可促進造血干細胞向中性粒細胞和單核/巨噬細胞分化、增殖。我們進一步研究

3、了GM-CSF對單核細胞吞噬、殺傷T.asahii功能的影響,探討應用GM-CSF輔助治療T.asahii感染的可能性。
  研究表明,T.asahii感染所致的播散性毛孢子菌病,其高死亡率與菌株耐藥及T.asahii形成生物膜的能力密切相關(guān)。由于研發(fā)新型抗真菌藥物周期長,投資巨大,在已有藥物中發(fā)掘抗真菌藥物增效劑成為近年來抗真菌感染領域的研究熱點。為了解決臨床常見的T.asahii耐藥問題,我們查閱了國內(nèi)外關(guān)于抗真菌藥物增效劑的

4、相關(guān)文獻,選擇舍曲林及鹽酸小檗堿作為藥物增效劑,進行了體外藥敏試驗,觀察它們聯(lián)合應用氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑及兩性霉素B對T.asahii游離細胞及生物膜是否有協(xié)同抑制作用,試圖篩選出既有協(xié)同抗菌作用,又可抑制生物膜形成的輔助治療藥物。
  方法:
  第一部分:人THP-1單核細胞對T.asahii感染的基因表達譜反應
  第二部分:粒-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)對人THP-1單核細胞抗T.asahii感

5、染活性的增強作用
  第三部分:舍曲林、鹽酸小檗堿聯(lián)合抗真菌藥物對T.asahii游離細胞及生物膜的體外協(xié)同抗菌作用
  結(jié)果:
  第一部分:人THP-1單核細胞對T.asahii感染的基因表達譜反應
  1.人THP-1單核細胞與T.asahii體外相互作用后的基因表達譜變化:共篩選出1315個差異表達基因,其中463個基因表達明顯上調(diào),852個基因表達明顯下調(diào)。應用DAVID6.7進行基因功能注釋聚類分析,

6、上調(diào)的基因共得到30個GO基因注釋聚類和1個KEGG pathway注釋聚類,下調(diào)的基因共得到33個GO基因注釋聚類和1個KEGG pathway注釋聚類。生物信息學分析提示上調(diào)的差異表達基因主要涉及固有免疫反應、適應性免疫反應、炎癥反應、凋亡和抗凋亡等生物學反應。下調(diào)的差異表達基因主要涉及細胞周期、有絲分裂、DNA修復等生物學過程。上調(diào)幅度最大的基因主要為編碼促炎細胞因子及趨化因子的基因。
  2.Real time PCR驗證

7、基因表達譜數(shù)據(jù):IL-1β、TNF-α、CCL3、NF-κB1、TLR4及NLRP3在mRNA水平的表達明顯上調(diào),CCR2的表達明顯下調(diào),Real time PCR與基因表達譜芯片檢測同一基因的表達變化趨勢一致。
  3.ELISA法驗證基因表達譜數(shù)據(jù):人THP-1單核細胞與T.asahii體外相互作用3h、6h、9h及12h后,TNF-α、IL-1β及CCL3的蛋白表達水平均明顯高于對照組(P<0.05),與基因表達譜同一基因的

8、表達變化趨勢一致。
  第二部分:粒-巨噬細胞集落刺激因子對人THP-1單核細胞抗T.asahii感染活性的增強作用
  1.GM-CSF對人THP-1單核細胞吞噬T.asahii的影響:重組人GM-CSF預孵育可使人THP-1單核細胞對T.asahii的吞噬率(相互作用1小時)從20%提高到84%左右。人THP-1單核細胞對T.asahii的吞噬率隨重組人GM-CSF濃度(100U/ml、200U/ml及400U/ml)增

9、高而升高,具有濃度依賴性。
  2.GM-CSF對人THP-1單核細胞殺傷T.asahii功能的影響:200U/ml及400U/ml的重組人GM-CSF預孵育組,每毫升T.asahii菌落形成單位較對照組明顯減少(P<0.05)。
  第三部分:舍曲林、鹽酸小檗堿聯(lián)合抗真菌藥物對T.asahii游離細胞及生物膜的體外協(xié)同抗菌作用
  1.舍曲林、鹽酸小檗堿聯(lián)合抗真菌藥物對T.asahii游離細胞的體外藥敏試驗:舍曲林單

10、藥對21株T.asahii臨床株的MIC50為4-8μg/ml,MIC100為8-32μg/ml。舍曲林與抗真菌藥物聯(lián)合應用可明顯降低氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、兩性霉素B對T.asahii游離細胞的MIC50及MIC100。舍曲林與氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑及兩性霉素B對大部分T.asahii菌株均有明顯的協(xié)同抗菌作用(FICI≤0.5)。其中與兩性霉素B的協(xié)同作用最強,90.5%的菌株(19株)觀察到舍曲林與兩性霉素B聯(lián)合應用有協(xié)同

11、抗菌作用。
  鹽酸小檗堿單藥對所有T.asahii菌株的MIC50及MIC100均>128μg/ml。鹽酸小檗堿與抗真菌藥物聯(lián)合應用可明顯降低氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、兩性霉素B對T.asahii游離細胞的MIC50及MIC100。鹽酸小檗堿與氟康唑、及兩性霉素B對大部分T.asahii菌株均有明顯的協(xié)同抗菌作用(FICI≤0.5)。其中與兩性霉素B的協(xié)同作用最強,71.4%的菌株(15株)觀察到舍曲林與兩性霉素B聯(lián)合應用有協(xié)

12、同抗菌作用。
  2.舍曲林、鹽酸小檗堿聯(lián)合抗真菌藥物對T.asahii生物膜的體外藥敏試驗:舍曲林單藥對T.asahii生物膜顯示出明顯的抑制作用(SMIC5016-32μg/ml,SMIC8032-64μg/ml)。舍曲林與抗真菌藥物聯(lián)合應用可明顯降低氟康唑、兩性霉素B對T.asahii生物膜的SMIC50,但對四種抗真菌藥物的SMIC80無明顯影響。舍曲林與兩性霉素B聯(lián)合應用對T.asahii生物膜有較明顯的協(xié)同抑制作用,8

13、1%的菌株(17株)觀察到舍曲林與兩性霉素B聯(lián)合應用對T.asahii生物膜有協(xié)同抑制作用,而舍曲林聯(lián)合應用三種唑類抗真菌藥物對T.asahii生物膜未見明顯的協(xié)同抑制作用。
  鹽酸小檗堿單藥對所有21株T.asahii臨床株生物膜均無明顯抑制作用(SMIC50及SMIC100均>128μg/ml)。鹽酸小檗堿與抗真菌藥物聯(lián)合應用可降低氟康唑、兩性霉素B對T.asahii生物膜的SMIC50,但對四種抗真菌藥物的SMIC80無明

14、顯影響。鹽酸小檗堿聯(lián)合應用三唑類抗真菌藥物對T.asahii生物膜未見明顯的協(xié)同抑制作用。28.6%的菌株(6株)觀察到鹽酸小檗堿與兩性霉素B聯(lián)合應用對T.asahii生物膜有協(xié)同抑制作用,但有協(xié)同作用的比例較低,需要擴大樣本量以進一步驗證兩者的協(xié)同作用。
  結(jié)論:
  1.本課題的基因表達譜研究在轉(zhuǎn)錄水平上揭示了宿主單核細胞對T.asahii感染的整體反應。人THP-1單核細胞遭遇T.asahii感染,可出現(xiàn)大量抗真菌感

15、染免疫及細胞生物學相關(guān)基因的差異表達。其中,表達上調(diào)幅度最高的均是編碼促炎細胞因子的基因,如TNF-α、IL-1β及CCL3等,提示人THP-1單核細胞可通過上調(diào)促炎細胞因子、趨化因子等炎性介質(zhì)的表達,產(chǎn)生強大的炎癥反應,發(fā)揮抗T.asahii感染作用。此外,部分適應性免疫反應相關(guān)基因的表達明顯上調(diào),提示人THP-1單核細胞試圖進一步激活適應性免疫反應以增強宿主抗T.asahii感染的能力。
  2.重組人GM-CSF可明顯增強人

16、THP-1單核細胞對T.asahii的吞噬、殺傷活性。應用重組人GM-CSF輔助治療T.asahii播散性感染是一種可行的治療策略。
  3.舍曲林有明顯的體外抑制T.asahii游離細胞及生物膜活性。對于應用醫(yī)療植入物等有形成T.asahii生物膜風險的重癥患者,舍曲林以其明顯的抗T.asahii生物膜活性及較小的副作用,顯示出很好的臨床應用價值。舍曲林及鹽酸小檗堿可提高T.asahii對氟康唑、兩性霉素B等常用抗真菌藥的敏感性

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