免疫抑制小鼠阿薩希絲孢酵母菌皮膚感染差異表達(dá)基因的初步篩選.pdf

1、目的 觀察免疫抑制小鼠和健康小鼠在遭遇條件致病真菌—阿薩希絲孢酵母菌初期,皮膚組織基因表達(dá)的差異;篩選出宿主抵抗該真菌感染的免疫相關(guān)基因,并探討這些基因及其表達(dá)產(chǎn)物在防御阿薩希絲孢酵母菌感染發(fā)生過程當(dāng)中的作用,從真菌感染免疫學(xué)角度提高我們對于阿薩希絲孢酵母菌所導(dǎo)致的局部感染及系統(tǒng)性感染——播散性毛孢子菌病發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識.方法12周齡、BCLB/C、雄性小鼠,共12只,隨機(jī)分成試驗(yàn)組和對照組,在接種條件致病真菌阿薩希絲孢酵母菌前3天,試驗(yàn)

2、組小鼠給予環(huán)磷酰胺腹腔注射(200mg/kg),使該組小鼠的免疫功能受到抑制,對照組小鼠保持正常的免疫功能.3天后,選取小鼠腹部皮膚,皮內(nèi)接種阿薩希絲孢酵母菌細(xì)胞混懸液0.2ml(濃度為1×10<'5>CFU/ml,其中孢子比例>95﹪).接種后24h,處死全部小鼠,解剖獲得皮損組織,提取總RNA,,用不同的熒光染料Cy5(紅色)、Cy3(綠色)分別對實(shí)驗(yàn)組、對照組RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄所獲的cDNA進(jìn)行標(biāo)記,將標(biāo)記后的cDNA與同一小鼠基因表

3、達(dá)譜芯片進(jìn)行雜交,洗片后用不同波長的激光對芯片進(jìn)行照射,來源于試驗(yàn)組與對照線的cDNA因標(biāo)記熒光染料的不同而分別產(chǎn)生紅色或綠色熒光,用scan array 4000掃描儀對芯片雜交熒光信號進(jìn)行掃描,并用Gene Pix3.0圖像處理軟件對所獲信號強(qiáng)度進(jìn)行分析.通過對兩種熒光信號相對強(qiáng)度的分析,得到實(shí)驗(yàn)、對照兩組基因表達(dá)的差異情況,利用Genebank及Pubmed等數(shù)據(jù)庫對所獲全部差異表達(dá)基因的功能進(jìn)行分析,從而篩選出免疫功能相關(guān)的差異