水蛭提取物對PMA誘導(dǎo)的THP-1細胞中MMP-2、9、13表達水平的影響及其作用機制.pdf

1、由于人口老齡化、不健康生活方式、環(huán)境污染等因素的影響，心腦血管疾病已成為全球第一位致死性疾病。動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是心血管疾病的重要病理基礎(chǔ)，是一種常見的慢性炎癥性疾病，其主要病理癥狀是在動脈血管壁上形成含有脂質(zhì)成分的斑塊，其上附著有纖維帽。斑塊一旦破裂將可能導(dǎo)致心肌梗死、中風(fēng)、周圍性血管病變等一系列并發(fā)癥。
　　水蛭(Whitmania pigra Whitman)是我國傳統(tǒng)中藥，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)一般認為

2、其具有破血逐瘀之效，《中國藥典》記載其用于血瘀經(jīng)閉，癥瘕痞塊，中風(fēng)偏癱，跌撲損傷。實驗室前期動物實驗已證明水蛭提取物(leech extracts，LE)能顯著抑制AS的發(fā)展，目前大量研究表明基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)在AS發(fā)展過程中起重要作用，因此本課題在前期工作基礎(chǔ)上結(jié)合AS研究動向，研究LE對人巨噬細胞分泌MMPs的影響，并對其作用機制進行探討。具體實驗過程及結(jié)果如下。
　

3、　1、LE抑制了PMA誘導(dǎo)的THP-1細胞的侵襲能力
　　以PMA刺激THP-1細胞建立實驗?zāi)Ｐ停l(fā)現(xiàn)刺激后細胞由圓形的懸浮狀態(tài)變?yōu)橘N壁扁平狀態(tài)，其分泌MMPs的能力變強，在此模型基礎(chǔ)上采用0.8μm孔徑的Transwell研究細胞的侵襲能力，具體方法為在小室上側(cè)平鋪Matrigel以模擬細胞外基質(zhì)，在其上加入THP-1細胞，以檢測細胞通過分解Matrigel從而穿過小室孔徑的能力，實驗結(jié)果顯示THP-1經(jīng)PMA刺激后侵襲能力明顯

4、增強，而LE能顯著抑制該過程。
　　2、LE抑制了PMA誘導(dǎo)的THP-1細胞中MMPs的表達水平及活性
　　收集細胞上清液，采用明膠酶譜法觀察MMP-2和MMP-9分解明膠的能力，來分析細胞分泌上述MMPs的情況，通過Western blotting及RT-PCR的方法分析細胞表達MMP-9,MMP-13的能力，上述實驗結(jié)果均顯示LE能顯著抑制PMA誘導(dǎo)的THP-1細胞表達和分泌MMPs的能力。
　　3、LE通過EMM

5、PRIN及MAPK信號通路抑制MMPs表達
　　EMMPRIN是細胞表面的MMPs誘導(dǎo)因子，能促進單核細胞/巨噬細胞中MMPs的表達，本課題通過免疫細胞熒光技術(shù)和Western blotting對PMA誘導(dǎo)的THP-1表達EMMPRIN的水平進行了檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)LE抑制了該因子的表達。同時本實驗進行了信號通路研究，發(fā)現(xiàn)LE能通過抑制MAPK信號通路來影響PMA誘導(dǎo)的THP-1細胞中EMMPRIN與MMPs的表達。
　　綜上所