在腎內(nèi)髓質(zhì)中RXRα與OREBP相互作用對滲透壓調(diào)節(jié)的影響與機(jī)制研究.pdf

1、目的：滲透應(yīng)激調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子OREBP（osmotic response element binding protein）可參與調(diào)節(jié)與滲透壓有關(guān)的基因。在高滲環(huán)境中OREBP可調(diào)節(jié)其下游與滲透相關(guān)的靶基因的表達(dá)，使有機(jī)大分子物質(zhì)和熱休克蛋白大量聚集在細(xì)胞中，維持細(xì)胞正常的形態(tài)和生理功能。維甲酸X受體α（retinoid X receptorα，RXRα）可與多種核受體形成異源二聚體調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，但它與OREBP的相互作用及其對機(jī)體滲透壓

2、的影響迄今為止還不清楚。本研究從體外和體內(nèi)兩個方面來研究在腎內(nèi)髓質(zhì)中 RXRα與OREBP的相互作用對滲透壓的調(diào)節(jié)作用，并深入探討這一作用的機(jī)制。
　　方法：（1）在體外培養(yǎng)的mIMCD3細(xì)胞中，改變NaCl的作用時間和作用濃度，用Western Blot和Real-Time PCR來檢測滲透壓改變對RXRα表達(dá)水平的影響。（2）通過轉(zhuǎn)染RXRα的過表達(dá)質(zhì)?；蚋缮尜|(zhì)粒來改變mIMCD3細(xì)胞中RXRα的表達(dá)，用螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因

3、檢測試劑盒和染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)檢測RXRα對OREBP轉(zhuǎn)錄活性及其靶基因的影響；用免疫共沉淀技術(shù)檢測RXRα蛋白和OREBP蛋白間的關(guān)系。（3）將6-8周齡C57BL/6雄性小鼠隨機(jī)分為三組：正常組、禁水組和呋塞米組，用IHC、Western Blot和Real-Time PCR檢測不同條件下小鼠腎髓質(zhì)中RXRα的表達(dá)水平；用Real-Time PCR檢測小鼠體內(nèi)環(huán)境的改變對腎髓質(zhì)中OREBP及其下游滲透靶基因NET、TauT、Hsp

4、70和AR mRNA表達(dá)的影響。（4）給6-8周齡C57BL/6雄性小鼠的腎臟直接注射慢病毒介導(dǎo)的RXRα，特異性的增加小鼠腎臟中RXRα的表達(dá)，對小鼠腎臟進(jìn)行組織切片和H&E染色，研究RXRα過表達(dá)對小鼠腎髓質(zhì)的形態(tài)學(xué)影響；用IHC檢測腎髓質(zhì)中RXRα、Hsp70和AR的蛋白表達(dá)；同時，用Real-Time PCR檢測小鼠腎髓質(zhì)中OREBP下游滲透靶基因NET、TauT、Hsp70和AR的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）在mIM

5、CD3細(xì)胞中，滲透壓條件的改變會影響RXRα的表達(dá)。在高滲條件下，隨著NaCl作用時間的延長RXRα的表達(dá)逐漸降低；NaCl作用8 h后，RXRα的表達(dá)降到最低。此外，RXRα的表達(dá)也隨著滲透壓濃度的改變發(fā)生改變，即隨著滲透濃度的增加RXRα的表達(dá)水平會逐漸降低。（2）RXRα過表達(dá)會降低OREBP的轉(zhuǎn)錄活性及其靶基因的表達(dá)，而抑制RXRα的表達(dá)OREBP的轉(zhuǎn)錄活性及其靶基因的表達(dá)均有所增加；無論在高滲還是等滲環(huán)境中過表達(dá)或干涉RXRα

6、都不會影響OREBP的表達(dá)；RXRα與OREBP在結(jié)構(gòu)上相互作用，從而阻止OREBP與其靶基因啟動子結(jié)合，進(jìn)而影響OREBP對滲透壓的調(diào)節(jié)。（3）在小鼠腎髓質(zhì)中RXRα的表達(dá)會隨著小鼠體內(nèi)滲透壓環(huán)境的改變而改變，而 OREBP及其下游滲透壓相關(guān)靶基因 mRNA的表達(dá)則隨著滲透壓的升高而升高。（4）過表達(dá)RXRα?xí)淖冃∈竽I髓質(zhì)的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)；此外，RXRα過表達(dá)會抑制小鼠腎髓質(zhì)中OREBP下游滲透壓相關(guān)靶基因的表達(dá)。
　　結(jié)論：RX