TACC3表達對膀胱尿路上皮癌T24細胞系遷移和侵襲的影響.pdf

1、目的：
　　檢測轉(zhuǎn)錄相關(guān)酸性卷曲蛋白3(TACC3)在膀胱尿路上皮癌T24細胞系中的表達情況，同時探討下調(diào) TACC3表達水平通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT）的發(fā)生對膀胱癌T24細胞遷移和侵襲的影響。
　　方法：
　　采用Western blot方法檢測膀胱尿路上皮癌T24細胞系和膀胱上皮永生化細胞SV-HUC-1細胞系TACC3蛋白的表達情況；通過體外構(gòu)建

2、shRNA表達載體并通過qPCR篩選有效靶點，用TACC3-shRNA相關(guān)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染膀胱癌T24細胞系來下調(diào)TACC3水平；采用Western Blot和熒光定量PCR技術(shù)驗證干擾效果，同時檢測TACC3和EMT相關(guān)mRNA和蛋白的表達水平，細胞劃痕試驗計算細胞24h修復(fù)率， Transwell侵襲試驗檢測細胞侵襲情況。
　　結(jié)果：
　　在膀胱尿路上皮癌T24細胞系及膀胱上皮永生化細胞SV-HUC-1細胞系兩組細胞系中，Wes

3、tern Blot結(jié)果表明TACC3蛋白相對灰度值分別為：0.22±0.02、0.99±0.05。膀胱癌T24細胞系中TACC3蛋白的表達量明顯高于膀胱上皮永生化細胞SV-HUC-1細胞系，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。體外構(gòu)建4個TACC3-shRNA干擾質(zhì)粒，qPCR檢測并篩選TACC3的mRNA表達，獲得了對TACC3干擾效率達到90.5％的pYr-LVX-TACC3-shRNA質(zhì)粒;下調(diào)TACC3水平后，熒光定量PCR技術(shù)檢

4、測TACC3和EMT相關(guān)（E-cadherin、Twist、Vimentin、Snail、MMP-9）的mRNA變化情況，結(jié)果示：EMT相關(guān)指標（E-cadherin、Vimentin、Twist、Snail、MMP-9）的相對mRNA表達量分別為1.11±0.13、0.26±0.04、0.38±0.06、1.11±0.04、0.41±0.03，相應(yīng)地采用WB方法驗證以上Maker的表達變化情況，我們所得到的驗證結(jié)論就是TACC3和EM

5、T相關(guān)（E-cadherin、Twist、Vimentin、Snail、MMP-9）蛋白的相對灰度值分別為1.08±0.06、0.17±0.04、0.07±0.01、0.14±0.01、0.35±0.13。細胞劃痕試驗檢測膀胱T24細胞24h修復(fù)率，結(jié)果示TACC3-shRNA可抑制T24細胞的遷移達（25.50±0.9609）%(24h)；Transwell侵襲試驗檢測膀胱T24細胞的侵襲程度變化，結(jié)果示光鏡下平均視野下control

6、組、NC組及shRNA組的平均侵襲細胞數(shù)分別為326.8±14.09、311.3±8.664及143.3±10.62，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　TACC3在膀胱尿路上皮癌T24細胞系中高表達，體外實驗證實通過誘導(dǎo)膀胱癌 T24細胞的 EMT的發(fā)生，導(dǎo)入構(gòu)建的干擾效率為90.5%的pYr-LVX-TACC3-shRNA質(zhì)粒，下調(diào)TACC3的表達后，膀胱癌T24細胞的遷移和侵襲能力下降。提示TACC3可能通過調(diào)節(jié)EMT