miR-155在TNF-α誘導(dǎo)的HUVECs凋亡中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察miR-155在TNF-α誘導(dǎo)的HUVECs中的表達(dá)情況，明確miR-155對TNF-α促HUVEC凋亡的調(diào)控作用，探討其靶點(diǎn)及作用機(jī)制。
　　方法：
　?。?）首先根據(jù)TNF-α處理濃度的不同分為以下六個濃度組，即0ng/mL組、1ng/mL組、10ng/mL組、20ng/mL組、40ng/mL組和100ng/mL組；再將各濃度組分別分成以下四個不同時間處理組，即0h組、12h組、24h組和48h組。采用MTT法

2、檢測各組細(xì)胞存活率、Heochst33342染色法檢測各組細(xì)胞的凋亡情況，由此確定TNF-α誘導(dǎo)HUVECs凋亡模型的最佳處理濃度和處理時間；
　?。?）qPCR法檢測TNF-α誘導(dǎo)HUVECs凋亡模型中miR-155的表達(dá)情況；
　?。?）轉(zhuǎn)染miR-155 mimics使miR-155過表達(dá)，轉(zhuǎn)染anti-miR-155沉默miR-155表達(dá)，設(shè)立空白對照組、陰性對照組、TNF-α組、miR-155 mimics組、an

3、ti-miR-155組，qPCR法檢測各組miR-155表達(dá)情況，MTT法檢測各組細(xì)胞存活率；Heochst33342和Annexin V-FITC/ PI雙染法分別檢測各組HUVECs凋亡情況；
　?。?）生物信息學(xué)軟件預(yù)測miR-155靶基因；
　　（5）Western blot法檢測各組FADD、Caspase-3及Active-caspase-3蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　?。?）HUVECs的存活率隨

4、著TNF-α處理時間的延長和處理濃度的增加而降低，HUVECs的凋亡率隨TNF-α處理時間的延長和處理濃度的增加而升高，并確定TNF-α誘導(dǎo)HUVECs凋亡模型的最佳處理條件為10ng/ml TNF-α處理24h。
　?。?）qPCR結(jié)果表明，10ng/ml TNF-α處理HUVECs24h后，miR-155的表達(dá)明顯升高（P＜0.01）。
　?。?）qPCR結(jié)果表明，miR-155 mimics上調(diào)HUVECs中miR-1

5、55表達(dá)水平（P＜0.01），anti-miR-155抑制HUVECs中miR-155表達(dá)（P＜0.01）；與TNF-α組相比，miR-155 mimics組HUVECs存活率明顯提高（P＜0.01）、凋亡率顯著降低（P＜0.01），anti-miR-155組HUVECs生存率明顯降低（P＜0.01）、凋亡率顯著增高（P＜0.01）。
　?。?）生物信息學(xué)軟件預(yù)測出FADD、Caspase-3可能是miR-155的靶基因。