托滅酸對人胃癌AGS細胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、背景:托滅酸(Tolfenamic acid，2-[(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸）是一種新型的非甾體類抗炎藥，其作用機理是通過抑制環(huán)氧合酶的產生而發(fā)揮解熱鎮(zhèn)痛的作用，目前臨床上主要應用于類風濕關節(jié)炎、偏頭痛等疾病的治療。近年來，國內外學者對此進行了多方面的研究，發(fā)現托滅酸在抑制腫瘤細胞生長、誘導細胞凋亡、干擾細胞信號轉導、調節(jié)原癌基因與抑癌基因活性、抑制腫瘤血管形成等也發(fā)揮重要作用，對胰腺癌、食管癌、結直腸癌等消化系統(tǒng)惡性腫瘤都

2、顯示出抑制作用，但尚未報道托滅酸對胃癌的抗腫瘤活性，本課題旨在利用流式細胞術檢測AGS細胞凋亡率、MTT法檢測細胞增殖情況、Western Blotting法檢測Bcl-2與Bax蛋白相對表達量等手段初步探索托滅酸對胃癌AGS細胞的抗腫瘤作用。
　　目的:研究托滅酸對胃癌AGS細胞的抗腫瘤效果及其機制。
　　方法:
　　1.通過AnnexinⅤ FITC/PI雙染色，流式細胞術檢測探討托滅酸對胃癌AGS細胞凋亡率的影響

3、;
　　2.通過MTT法測試不同濃度、不同時間托滅酸對胃癌AGS細胞生長的影響，并繪制生長曲線圖;
　　3.通過Hochest33258核染色檢測托滅酸對AGS細胞凋亡的影響，并與對照組對比，在熒光顯微鏡下觀察細胞凋亡的差異;
　　4.通過Western Blotting法檢測托滅酸作用下凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax相對表達量及Bcl-2/Bax比值。
　　結果：
　　1.陰性對照組、50μ mol/L、

4、100μmol/L、200μ mol/L托滅酸組作用24小時后行流式細胞術檢測凋亡率(％)分別為15.32±2.26、29.87±4.76、54.82±4.49、72.13±5.53。與對照組相比，托滅酸不同濃度的處理組對胃癌細胞的促凋亡作用明顯增加，并且凋亡率隨著藥物濃度梯度的增高而增高。
　　2.胃癌AGS細胞經50μ mol/L、100μ mol/L、200μmol/L托滅酸處理后24h、48h、72h后，MTT法檢測提示與

5、陰性對照組對比，細胞增殖能力受到明顯抑制，并且隨著藥物濃度的增大，抑制能力也增強。
　　3.對照組凋亡細胞數為2.32±0.54，托滅酸組為9.17±1.38，P＜0.05。與對照組相比，托滅酸組細胞在托滅酸作用24小時后，Hoechst33258染料核染色顯示，濃染與碎裂細胞明顯增多。
　　4.通過Western Blotting法檢測50μ mol/L、100μ mol/L、200μ mol/L托滅酸處理后AGS細胞Bc

6、l-2與Bax蛋白相對表達量，其中Bcl-2分別為1.42±0.11、0.95±0.14、0.63±0.08，Bax蛋白分別為0.28±0.03、0.57±0.05、0.86±0.09，P＜0.05，可以看出隨著藥物濃度的增加，Bcl-2/Bax蛋白比例減少。
　　結論：
　　1.托滅酸可通過抑制胃癌AGS細胞生長增殖和促進細胞凋亡以達到抗腫瘤的作用。
　　2.托滅酸促進胃癌AGS細胞凋亡的作用與Bcl-2蛋白表達的降