SPIO與Fth1基因標(biāo)記BMSCs治療腦梗死的MRI示蹤對(duì)照研究.pdf

1、研究目的:
　　1.分析、比較SPIO與Fth1基因兩種不同方法標(biāo)記的BMSCs在局灶性腦梗死病灶中 MRI低信號(hào)的分布及示蹤時(shí)間，探討兩種不同標(biāo)記方法 MRI示蹤的穩(wěn)定性、時(shí)效性及差異性。
　　2.分析、比較SPIO與Fth1基因標(biāo)記在MRI不同序列上信號(hào)改變的敏感性，探尋兩種標(biāo)記方法的最佳MRI示蹤序列。
　　3.分析立體定向注射BMSCs對(duì)局灶性腦梗死修復(fù)過程影響的影像學(xué)表現(xiàn)，結(jié)合病理，評(píng)價(jià)BMSCs對(duì)局灶性腦梗

2、死的治療價(jià)值。
　　研究方法:
　　1.采用全骨髓直接貼壁法分離、培養(yǎng)BMSCs，通過流式細(xì)胞術(shù)及成骨、成脂肪誘導(dǎo)分化進(jìn)行鑒定。普魯士藍(lán)染色及CCK8法確定標(biāo)記BMSCs的最佳SPIO濃度。
　　2.用慢病毒構(gòu)建攜帶Fth1基因表達(dá)的載體，并轉(zhuǎn)染BMSCs，熒光定量PCR、Western blot觀察Fth1在BMSCs內(nèi)的表達(dá)情況。普魯士藍(lán)染色觀察Fth1-BMSCs的儲(chǔ)鐵能力，CCK8法檢測(cè)Fth1-BMSCs的增

3、殖活性。
　　3.制備局灶性腦梗死模型，設(shè)立正常、假手術(shù)及手術(shù)對(duì)照，采用立體定向法分別注射 SPIO及 SPIO-BMSCs，采用頸內(nèi)靜脈法分別注射 SPIO-BMSCs和Fth1-BMSCs，分別對(duì)不同標(biāo)記法和不同移植法等各組進(jìn)行MRI示蹤觀察。
　　4.對(duì)治療后各組的腦組織標(biāo)本行普魯士藍(lán)染色及病理觀察，探討MRI表現(xiàn)的病理基礎(chǔ)，并評(píng)價(jià)BMSCs對(duì)大鼠梗死腦組織修復(fù)作用的價(jià)值。
　　研究結(jié)果:
　　1.定向注射

4、SPIO-BMSCs后隨時(shí)間推移，在MRI圖像上局灶性腦梗死面積隨時(shí)間推移逐漸縮??；而手術(shù)對(duì)照及SPIO注射組的梗死灶隨時(shí)間推移，梗死面積無明顯縮小。
　　2.頸靜脈注射法可見SPIO-BMSCs組隨時(shí)間推移，MRI低信號(hào)強(qiáng)度逐漸減弱，最后消失；而Fth1-BMSCs鐵蛋白表達(dá)穩(wěn)定，移植10天左右檢測(cè)梗死灶MRI低信號(hào)強(qiáng)度穩(wěn)定，至60天也不隨時(shí)間推移而衰減。
　　3. SWI可顯示SPIO標(biāo)記30天內(nèi)的BMSCs及持續(xù)顯示F

5、th1-BMSCs在局灶性腦梗死灶低信號(hào)改變。T2WI對(duì)Fth1標(biāo)記BMSCs不敏感，且僅能示蹤SPIO標(biāo)記后20天左右的BMSCs，表明Fth1標(biāo)記BMSCs細(xì)胞內(nèi)鐵濃度相當(dāng)于50μg/ml SPIO標(biāo)記 BMSCs后20天左右的細(xì)胞內(nèi)鐵濃度，也表明 SWI可檢測(cè)更低濃度SPIO的低信號(hào)改變，其較T2WI更敏感。
　　4.病理觀察發(fā)現(xiàn)：SPIO-BMSCs移植治療43天后的腦組織內(nèi)僅少量普魯士藍(lán)染色陽(yáng)性細(xì)胞僅分布于梗死灶邊緣；F

6、th1-BMSCs移植治療60天后的腦組織內(nèi)多量的普魯士藍(lán)染色陽(yáng)性細(xì)胞分布于梗死灶邊緣區(qū)并向中央彌散。
　　研究結(jié)論:
　　1. Fth1基因慢病毒轉(zhuǎn)染BMSCs移植治療局灶性腦梗死安全可靠，可行MRI示蹤，與SPIO標(biāo)記法相比，F(xiàn)th1基因標(biāo)記BMSCs內(nèi)含鐵量相當(dāng)于50μg/ml SPIO標(biāo)記BMSCs后20天左右的細(xì)胞內(nèi)含鐵量，但其具有更高的穩(wěn)定性，且示蹤時(shí)程更長(zhǎng)。
　　2. SWI可持續(xù)顯示Fth1標(biāo)記BMSC