衰老導(dǎo)致女性面部皮下脂肪萎縮分子機(jī)理初探.pdf

1、皮下脂肪組織位于真皮層和筋膜層之間，與內(nèi)臟脂肪組織和骨髓黃色脂肪組織共同構(gòu)成人體脂肪組織，其中皮下脂肪所占比例高達(dá)2/3。當(dāng)人體從青年階段進(jìn)入老年階段后，皮下脂肪貯存逐漸減少，同時(shí)彈力纖維與膠原纖維結(jié)構(gòu)改變使得皮膚彈性和張力都變?nèi)酰罱K導(dǎo)致中老年人皮膚產(chǎn)生下垂和凹陷皺紋。中老年人面部衰老主要是由于面部皮下脂肪組織層嚴(yán)重萎縮而導(dǎo)致面部組織坍陷的表觀現(xiàn)象。前人對(duì)于面部研究主要集中于表觀現(xiàn)象及組織結(jié)構(gòu)變化的研究，但對(duì)于面部主要組成皮下脂肪層減

2、少的機(jī)理研究甚少。
　　本研究主要通過(guò)揭示女性衰老過(guò)程中面部皮下脂肪組織萎縮的調(diào)控機(jī)理以及該部位脂肪源干細(xì)胞的增殖分化能力的變化，從而為進(jìn)一步了解衰老對(duì)女性面部影響并對(duì)開(kāi)發(fā)研究相應(yīng)抗衰老藥物奠定基礎(chǔ)。本研究獲得的主要結(jié)果如下：
　　1、通過(guò)對(duì)女性面部皮下脂肪組織石蠟切片和H&E染色,觀察細(xì)胞形態(tài)并統(tǒng)計(jì)相同視野面積中包含的脂肪細(xì)胞數(shù)目發(fā)現(xiàn),年輕組脂肪細(xì)胞顯著大于年老組脂肪細(xì)胞；且年輕組含細(xì)胞數(shù)顯著比年老組少。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：衰老

3、導(dǎo)致女性面部皮下脂肪細(xì)胞變小。
　　2、檢測(cè)不同個(gè)體(年輕組和年老組)脂肪細(xì)胞內(nèi)調(diào)控脂滴分解的相關(guān)因子（PERILIPIN、ATGL、HSL）的表達(dá)差異。通過(guò) qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，年輕組PERILIPIN、ATGL的mRNA表達(dá)量極其顯著高于年老組；雖然年老組面部皮下脂肪組織中 HSL mRNA表達(dá)量有下降趨勢(shì)，但差異并不顯著；Western Blot結(jié)果也表明，PERILIPIN、ATGL蛋白表達(dá)量在年輕組中都顯著高于年

4、老組。qRT-PCR和Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：衰老導(dǎo)致皮下脂肪細(xì)胞內(nèi)脂滴的降解速率下降。
　　3、檢測(cè)不同個(gè)體(年輕組和老年組)脂肪細(xì)胞內(nèi)調(diào)控線粒體生成及代謝相關(guān)因子（PGC-1α、COXIV）的表達(dá)差異。qRT-PCR結(jié)果顯示，在年老組內(nèi)，PGC-1α和COXIV的mRNA表達(dá)都顯著下降。Western Blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)年老組PGC-1α蛋白表達(dá)量顯著低于年輕組。qRT-PCR和Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明

5、：衰老導(dǎo)致皮下脂肪細(xì)胞內(nèi)線粒體生成及代謝速率下降。
　　4、通過(guò)EdU染色檢測(cè)衰老對(duì)女性面部皮下脂肪組織來(lái)源的脂肪源干細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示，相年老組比年輕組原代脂肪細(xì)胞 EdU陽(yáng)性率顯著下降，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：衰老導(dǎo)致女性皮下脂肪源干細(xì)胞克隆增殖能力下降。
　　5、通過(guò)對(duì)分化后的不同個(gè)體(年輕組和年老組)脂肪源干細(xì)胞進(jìn)行油紅 O染色，確定衰老對(duì)脂肪源干細(xì)胞成脂能力的影響。成脂誘導(dǎo)分化2d后，脂滴的沉積很微量，幾乎無(wú)法觀察得到

6、；成脂誘導(dǎo)分化5d后，年老組與年輕組已經(jīng)可以觀察得到脂滴沉積差異，年輕組要顯著高于年老組；當(dāng)成脂誘導(dǎo)分化8d、10d后，年輕組仍然顯著高于年老組；油紅O染色結(jié)果表明：衰老導(dǎo)致人脂肪源干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化后脂滴沉積能力下降。
　　6、qRT-PCR檢測(cè)不同個(gè)體(年輕組和年老組)脂肪源干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化0d、2d、5d、8d、10d后脂肪細(xì)胞分化相關(guān)調(diào)節(jié)基因PPARG、LPL、AP2、ADIPOQ的mRNA表達(dá)量。試驗(yàn)結(jié)果顯示，同一個(gè)體脂

7、肪源干細(xì)胞在成脂分化過(guò)程中，PPARG、LPL、AP2、ADIPOQ的mRNA表達(dá)量在前期都極顯著升高，但PPARG和LPL的mRNA到分化后期表達(dá)量有所下降；而不同個(gè)體(年輕組和老年組)脂肪源干細(xì)胞成脂分化相同天數(shù)時(shí)，在誘導(dǎo)分化前期，年輕組脂肪源干細(xì)胞的PPARG、LPL、AP2、ADIPOQ mRNA的表達(dá)量顯著或極顯著高于年老組；但在分化后期，年輕組與年老組的成脂分化相關(guān)調(diào)節(jié)基因PPARG、LPL、AP2、ADIPOQ的mRNA表