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文檔簡介
1、硒(selenium。Se)作為人體必需的微量營養(yǎng)元素,對血管內(nèi)皮功能和穩(wěn)態(tài)有一定影響,但發(fā)揮作用的功能硒形態(tài)尚不清楚。最近研究表明,甲基硒酸(methylseleninic acid。MSA)作為膳食營養(yǎng)硒代謝的重要中間產(chǎn)物,對細胞凋亡和PI3K/AKT信號有重要影響。為研究MSA對血管內(nèi)皮穩(wěn)態(tài)的調(diào)控作用,本論文主要利用細胞成管模型、離體小鼠主動脈莖環(huán)模型和雞胚尿囊膜模型,評價MSA對血管新生的抑制作用;采用人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVE
2、C)研究了 MSA抑制血管新生的作用機制。以HUVEC構(gòu)建單層內(nèi)皮細胞模型,觀察了MSA對單層內(nèi)皮細胞完整性的影響,并研究了其中作用機制;同時采用小鼠巨噬細胞Raw264.7和小鼠骨髓來源巨噬細胞(BMDM)研究了MSA對兩種細胞攝取氧化低密度脂蛋白的影響。主要結(jié)果如下:
1.在細胞水平構(gòu)建了細胞粘附、遷移和成管模型,發(fā)現(xiàn)MSA提高HUVEC對鼠尾I型膠原粘附,抑制細胞遷移以及管腔狀結(jié)構(gòu)形成;此外,我們構(gòu)建了離體小鼠主動脈莖環(huán)
3、模型和體內(nèi)雞胚尿囊膜模型,發(fā)現(xiàn)MSA明顯抑制主動脈莖環(huán)血管出芽新生并降低雞胚尿囊膜上血管網(wǎng)絡(luò)豐度。提示,MSA具有抑制血管新生的效應(yīng)。
2.利用血管人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC研究MSA抑制血管新生作用機制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),2μM MSA并未引起細胞凋亡。QPCR和Western blot結(jié)果顯示,MSA下調(diào)integrinβ3,且存在劑量和濃度效應(yīng);同時,MSA明顯抑制AKT/IκB/NF-κB級聯(lián)磷酸化以及NF-κB入核。免疫熒光
4、結(jié)果進一步表明,MSA干擾integrinβ3在運動細胞膜上聚集。
3.利用HUVEC構(gòu)建單層內(nèi)皮細胞模型,發(fā)現(xiàn)MSA(5μM)處理12 h后,少量細胞發(fā)生凋亡,氧化低密度脂蛋白滲漏透過單層內(nèi)皮細胞進入Transwell下層;研究發(fā)現(xiàn)MSA可能通過調(diào)節(jié)鈣蛋白酶活性調(diào)控內(nèi)皮完整性。此外,通過小鼠巨噬細胞Raw264.7和BMDM發(fā)現(xiàn),MSA處理對巨噬細胞攝取氧化低密度脂蛋白有一定抑制作用。
綜上所述,MSA具有抑制體內(nèi)
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