血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子對(duì)發(fā)育期癲癇持續(xù)狀態(tài)的神經(jīng)保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）干預(yù)發(fā)育期癲癇持續(xù)狀態(tài)（SE）后，不同時(shí)間點(diǎn)海馬組織內(nèi)神經(jīng)元特異性烯醇酶（NSE）、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）表達(dá)水平的變化，從而了解VEGF對(duì)SE的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　方法：生后14天（postnatal14，用P14表示，下同）的健康SD大鼠124只，隨機(jī)分為四組：空白對(duì)照組（CONT組，n=31）、海人酸對(duì)照組（KA對(duì)照組，n=31）、假手術(shù)對(duì)照組（磷酸緩沖液干預(yù)組，即PBS干預(yù)組，n

2、=31）和VEGF干預(yù)組（VEGF干預(yù)組，n=31）。P14時(shí)，VEGF干預(yù)組大鼠側(cè)腦室注射VEGF（濃度0.02μg/μl，劑量2μl，即VEGF0.04μg），PBS干預(yù)組大鼠側(cè)腦室注射同等劑量（即2μl）PBS，其余兩組不進(jìn)行側(cè)腦室注射。P15時(shí)，VEGF干預(yù)組、PBS干預(yù)組、KA對(duì)照組腹腔注射海人酸（濃度2mg/ml，劑量1.25ml/kg，即海人酸2.5mg/kg），建立幼鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)模型，CONT組腹腔注射同等劑量的生理鹽

3、水。在建模完成后第1天，每組隨機(jī)選取1只大鼠行HE染色進(jìn)行模型鑒定，并分別在模型建立后的第1、3、7、14、21天在各組中隨機(jī)選取6只大鼠，組成 P16亞組（n=6）、P18亞組（n=6）、P22亞組（n=6）、P29亞組（n=6）和P36亞組（n=6），取大腦海馬組織，采用免疫印跡技術(shù)（Western blot）測(cè)定大鼠海馬NSE、GFAP的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、海人酸誘導(dǎo)發(fā)育期癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠的行為特點(diǎn)：腹腔注射海

4、人酸約2-3min后，大鼠開(kāi)始出現(xiàn)驚厥發(fā)作，首先表現(xiàn)為煩躁不安、凝視、搔頭動(dòng)作、濕狗樣動(dòng)作、陣發(fā)性奔跑，然后出現(xiàn)肢體陣攣、抽搐，甚至出現(xiàn)全身強(qiáng)直-陣攣性發(fā)作，嚴(yán)重發(fā)作者衰竭致死。造模失敗率為5.10％，死亡率為4.08%。
　　2、海馬CA3區(qū)HE染色結(jié)果：CONT組大鼠海馬CA3區(qū)可見(jiàn)錐體細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰完整。KA對(duì)照組、PBS干預(yù)組海馬CA3區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞體積則明顯變小，細(xì)胞排列稀疏、不整齊，損傷嚴(yán)重者可見(jiàn)神經(jīng)元大量變

5、性、死亡；VEGF干預(yù)組較KA對(duì)照組、PBS干預(yù)組相比海馬神經(jīng)元變性、死亡減輕，胞體稍大，排列略規(guī)則，可見(jiàn)膠質(zhì)細(xì)胞輕度增生。
　　3、Western Blot結(jié)果：（1）海馬區(qū)NSE蛋白表達(dá)：SE發(fā)生后第一天起KA對(duì)照組、PBS干預(yù)組NSE蛋白表達(dá)水平即達(dá)到較高水平，并于第3d達(dá)到頂峰，在一周內(nèi)均維持在較高水平，至第14d時(shí)仍明顯高于CONT組；VEGF干預(yù)組NSE蛋白表達(dá)水平雖仍高于CONT組，但在SE后各時(shí)間點(diǎn)較KA對(duì)照組、P

6、BS干預(yù)組卻有所下降，且在第3d時(shí)差別最為明顯。（2）海馬區(qū)GFAP蛋白表達(dá)：SE發(fā)生后第一天起KA對(duì)照組、PBS干預(yù)組GFAP蛋白表達(dá)水平即開(kāi)始升高，明顯高于CONT組，并于SE后第7d達(dá)到峰值；VEGF干預(yù)組GFAP蛋白表達(dá)水平雖仍高于CONT組，但在第3d、7d和14d時(shí)間點(diǎn)較KA對(duì)照組、PBS干預(yù)組卻有所下降，在SE后第7d時(shí)差別最為明顯。
　　結(jié)論：
　　1、腹腔注射海人酸可以建立發(fā)育期SD大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)模型，其