基于Nrf2-ARE信號通道研究槲皮素磷脂復(fù)合物對氧化損傷視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　合成槲皮素磷脂復(fù)合物，以ARPE-19為研究對象，比較槲皮素及其磷脂復(fù)合物對t-BHP誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用;觀察槲皮素及其磷脂復(fù)合物對Nrf2/ARE信號通道及下游Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶的調(diào)控作用，闡明槲皮素保護(hù)氧化損傷細(xì)胞的機制。
　　方法:
　　采用溶劑法制備復(fù)合物，差示掃描量熱分析、紅外光譜分析、X-射線衍射分析進(jìn)行表征;測定單體及其復(fù)合物在水/氯仿中的溶解度。用t-BHP誘導(dǎo)ARP

2、E-19細(xì)胞氧化損傷，MTT、AnnexinⅤ-FITC/PI檢測槲皮素及其磷脂復(fù)合物對細(xì)胞存活率、凋亡率的影響。將ARPE-19細(xì)胞分成:溶媒對照組(DMSO)、氧化損傷組、Nrf2 siRNA組、藥物干預(yù)組、Nrf2siRNA+藥物干預(yù)組，熒光定量PCR檢測各組ARPE-19細(xì)胞Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL、mRNA轉(zhuǎn)錄，Western blot檢測各組ARPE-19細(xì)胞核內(nèi)Nrf2、胞質(zhì)Nrf2、HO-1、NQO-1、G

3、CL蛋白表達(dá)，分別用二氯熒光黃法、化學(xué)比色法、黃嘌呤氧化酶法和硫化巴比妥酸法測定細(xì)胞內(nèi)ROS、T-AOC、SOD、MDA含量。
　　結(jié)果:
　　差示掃描量熱分析、紅外光譜分析、X-射線衍射分析結(jié)果顯示槲皮素與磷脂復(fù)合后形成一種新的化合物;與槲皮素相比，復(fù)合物在水中的溶解度為原藥的3倍，在氯仿中的溶解度增加更明顯。終濃度為100μmol/L、200μmol/L和400μmol/L的槲皮素磷脂復(fù)合物與相同濃度的槲皮素比，氧化損傷

4、細(xì)胞的存活率均更高，凋亡率更低。熒光定量PCR、Westernblot檢測結(jié)果顯示，氧化損傷細(xì)胞NRF2、HO-1、NQO-1、GCL的表達(dá)增加，但在NRF2 siRNA細(xì)胞則增加幅度減少;槲皮素及其磷脂復(fù)合物能明顯上調(diào)NRF2、HO-1、NQO-1、GCL表達(dá)，且槲皮素磷脂復(fù)合物作用比單體更強，NRF2siRNA+藥物干預(yù)時上調(diào)作用減弱。氧化損傷細(xì)胞的SOD活性明顯降低，MDA、ROS大幅增加，T-AOC顯著降低，槲皮素及其磷脂復(fù)合物