淫羊藿黃酮體內(nèi)藥動學(xué)、組織分布及尿排泄研究.pdf

1、目的:
　　建立高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)法同時定量分析血漿、不同組織及尿液中朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷的方法;從體內(nèi)動力學(xué)、組織分布和尿排泄多層次研究朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷的體內(nèi)過程，為闡述淫羊藿黃酮體內(nèi)效應(yīng)物質(zhì)提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　實驗采用甲醇蛋白沉淀法提取血漿和組織勻漿中的朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷，以染料木素為內(nèi)標(biāo)，色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18柱（2

2、.1×150 mm，5μm）;采用電噴霧離子化(ESI)源，多反應(yīng)離子監(jiān)測(MRM)方式負(fù)離子檢測朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷，流動相:乙腈-0.1％乙酸水(32∶68);流速:0.3mL·min-1;柱溫:40℃。單次灌胃大鼠淫羊藿提取物水溶液(0.069 g·mL-1)后，測定給藥后血漿和組織樣品中朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷的濃度，繪制藥-時曲線，計算主要藥動學(xué)參數(shù)，分析其在大鼠體內(nèi)的分布規(guī)律。應(yīng)用LC-MS/MS法建立大鼠尿液中

3、朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷的同時測定方法，以人參皂苷Rgl為內(nèi)標(biāo)，選用Agilent EclipseXDB-C18色譜柱（2.1×150mm，5μm）;流動相:乙腈-0.1％乙酸水(30∶70);流速:0.3 mL·min-1;柱溫:40℃;采用電噴霧離子源(ESI)負(fù)離子多反應(yīng)檢測(MRM)模式測定。采用單次灌胃大鼠淫羊藿提取物水溶液的方式，測定給藥后尿液中朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷的濃度，計算主要尿排泄動力學(xué)參數(shù)，分析排泄規(guī)律。

4、
　　結(jié)果:
　　血漿樣品中，朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷在1-500 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，日內(nèi)精密度RSD＜8.7％，間精密度RSD＜14.6％;血漿中4種淫羊藿黃酮的AUC0-t分另為25.641±17.162 ug/L·h,24.957±15.765 ug/L·h,262.261±174.458ug/L·h和44.859±26.827 ug/L·h，Tmax分別為0.625±0.306 h，0.625

5、±0.306 h.0.625±0.306 h和0.583±0.382 h，t1/2分別為1.308±0.561 h，1.700±1.172 h，1.535±0.793 h和1.361±0.766 h，在組織樣品中，朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷在1-500ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，日內(nèi)精密度RSD＜8.4％，日間精密度RSD＜14.9％;結(jié)果表明朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷能在0.25-1 h內(nèi)迅速分布于各主要組織，各組織中濃

6、度于2h開始減少，至6h各組織中的淫羊藿黃酮基本消除。在尿液樣品中，朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷在1-500 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，日內(nèi)精密度RSD均＜7.4％，日間精密度RSD均＜12.7％。大鼠口服灌胃給予淫羊藿提取物36 h后朝藿定A、B、C及淫羊藿苷的平均尿累積排泄量/給藥量比值不超過0.266‰，0.198‰,0.297‰和0.425‰。
　　結(jié)論:
　　本研究所建立的LC-MS/MS方法快速、準(zhǔn)確

7、、可靠，適用于血漿和組織樣品中朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷的同時測定，血漿中4種淫羊藿黃酮峰濃度Cmax與相應(yīng)AUC0-t均不大，說明口服后吸收程度較低，Tmax和t1/2表明淫羊藿黃酮的吸收和消除均較快。從組織分布情況來看，朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷這4種黃酮成分，主要分布在大鼠肝、肺和雌性生殖器官中，提示這些器官可能是淫羊藿黃酮的靶器官。建立的適用于同時測定尿液中朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷的LC-MS/MS方法簡便靈敏快速，能夠