青蒿素類抗瘧藥動物體內(nèi)藥動學(xué)及體外代謝研究.pdf

1、青蒿素類藥物在瘧疾治療中，最大的不足是復(fù)發(fā)率高。體內(nèi)實驗已發(fā)現(xiàn)連續(xù)多日服用青蒿素類藥物后，血藥濃度未能達到穩(wěn)態(tài)，相反較第1日的血藥濃度有大幅度降低，這種時間依賴性藥動學(xué)被認為是由自身誘導(dǎo)代謝的結(jié)果，直接導(dǎo)致該藥的復(fù)發(fā)率高。體內(nèi)實驗同時發(fā)現(xiàn)連續(xù)用藥后半衰期基本不變，因此推測自身誘導(dǎo)代謝主要誘導(dǎo)了首過代謝，對系統(tǒng)清除影響不大，因而造成口服總體清除率(CL/F)增加，而對半衰期影響不大。靜注給藥能避免首過代謝，因此在本實驗中通過比較口服和靜注

2、不同給藥途徑給藥后的第5日藥動學(xué)，考察給藥途徑對時間依賴性藥動學(xué)的影響，研究首過代謝在自身誘導(dǎo)代謝中的作用。
　　 另外，通過肝微粒體體外孵化實驗，考察青蒿素、雙氫青蒿素在不同處理組大鼠肝微粒體孵化后藥物的代謝情況。
　　 一、青蒿素在犬體內(nèi)藥物動力學(xué)研究
　　 建立了液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法測定犬血漿中青蒿素（Artemisinin, ART）的濃度。以蒿甲醚（Artemether, AMT）為內(nèi)標(biāo)，采用乙腈和1

3、0mmol·L-1醋酸銨（含0.1％甲酸）溶液（85:15，v/v）為流動相，流速為0.3 mL·min-1，Agilent-C18（50×4.6 mm, 1.8 μm）色譜柱為分析柱，采用電噴霧電離源（ESI），多反應(yīng)監(jiān)測方式進行正離子檢測，用于定量分析的離子反應(yīng)分別為m/z 300.2→209.1（ART）和m/z 316.1→267.2（AMT）。該方法的線性范圍為2.0-500.0ng?mL-1，濃度定量下限為2.0ng?mL-

4、1。
　　 健康犬10只，隨機分為2組，一組采用口服方式連續(xù)給藥5日，每日1000mg，另一組采用靜注方式連續(xù)給藥5日給藥，每日60mg，各組分別于第1日、第5日采血，應(yīng)用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法測定血漿中青蒿素的含量并計算主要藥動學(xué)參數(shù)?？诜M達峰濃度(Cmax)和達峰時間(Tmax)為實測值。以半對數(shù)作圖法，由消除相末幾個濃度點計算消除速度常數(shù)k，并根據(jù)k 計算t1/2，利用軟件計算AUC0-t、AUC0-∞。第1日口服給藥后

5、Cmax為29.1±9.9 ng?mL-1，Tmax為1.9±0.7 h，t1/2為2.6±0.6 h、AUC0-t為88.2±26.8 h?ng?mL-1，AUC0-∞為93.5±28.0h?ng?mL-1。連續(xù)5日口服給藥后血藥濃度已基本測不出，未求算藥動學(xué)參數(shù)。靜注組以血藥濃度的對數(shù)對時間作圖得直線，由直線斜率和截距求出初始濃度C0消除速度常數(shù)k，并根據(jù)C0、k 計算V、t1/2。K和V的乘積即CL, C0和k 之比算AUC0-t

6、。
　　 第1日靜注給藥后的，t1/2為0.9±0.7 h，CL為27.8±12.9 L·h-1，V為26.0±10.6 L，AUC0-t為3568.9±3902.2 h·ng·mL-1。靜注連續(xù)給藥5日后的t1/2為0.2±0.04 h，CL為20.8±9.5L·h-1， V為7.5±4.5 L，AUC0-t為3363.7±1375.9 h·ng·mL-1?？诜?日組給藥后血藥濃度明顯低于單次給藥組，靜注組第5日給藥后t1/

7、2、CL、AUC0-t 無明顯差異。結(jié)果表明多劑量口服給藥后，血藥濃度呈現(xiàn)顯著的時間依賴性降低，而靜注給藥未發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象，表明自身誘導(dǎo)代謝主要影響了首過代謝過程，此外該藥在犬體內(nèi)的口服生物利用度很低，口服給藥的血藥濃度遠低于靜注給藥。
　　 二、雙氫青蒿素在犬體內(nèi)藥物動力學(xué)研究
　　 建立了液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法測定犬血漿中雙氫青蒿素（Dihydroartemisinin, DHA）的濃度。以青蒿素（Artemisini

8、n, ART）為內(nèi)標(biāo)，采用乙腈和10mmol·L-1醋酸銨（含0.1％甲酸）溶液（65:35，v/v）為流動相，流速為0.3 mL·min-1，Agilent-C18（50×4.6 mm, 1.8μm）色譜柱為分析柱，采用電噴霧電離源（ESI），多反應(yīng)監(jiān)測方式進行正離子檢測，用于定量分析的離子反應(yīng)分別為m/z 267.2→163.1(DHA)和m/z 300.3→209.2 (ART)。該方法的線性范圍為2.0-500.0ng?mL-1

9、，濃度定量下限為2.0ng/mL-1。
　　 健康犬10只，隨機分為2組，一組采用口服方式連續(xù)給藥5日，每日160mg，另一組采用靜注方式連續(xù)給藥5日給藥，每日60mg，各組分別于第1日、第5日采血。應(yīng)用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法測定血漿中雙氫青蒿素的含量并計算主要藥動學(xué)參數(shù)?？诜M達峰濃度(Cmax)和達峰時間(Tmax)為實測值。以半對數(shù)作圖法，由消除相末幾個濃度點計算消除速度常數(shù)k，并根據(jù)k 計算t1/2。利用軟件計算AUC0

10、-t、AUC0-∞。第1日口服給藥后Cmax為57.6±38.5 ng?mL-1，Tmax為2.1±0.7 h， t1/2為2.8±0.8 h，AUC0-t為165.4±77.6h?ng?mL-1，AUC0-∞為177.8±71.7 h?ng?mL-1。連續(xù)5日口服給藥后血藥濃度已基本測不出，未求算藥動學(xué)參數(shù)。靜注組以血藥濃度的對數(shù)對時間作圖得直線，由直線斜率和截距求出初始濃度C0消除速度常數(shù)k，并根據(jù)C0、k 計算V、t1/2。K和V

11、的乘積即CL，C0和k 之比算AUC0-t。第1日靜注給藥后的，t1/2為0.4±0.1h，CL為114.7±46.3 L·h-1， V為61.8±37.9 L，AUC0-t為574.8±162.3 h·ng·mL-1。連續(xù)5日靜注給藥后的t1/2為0.5±0.1h，CL為101.6±43.6 L·h-1，V為61.8±37.9 L，AUC0-t為722.7±396.9 h·ng·mL-1?？诜?日組給藥后血藥濃度明顯低于單劑組，靜注

12、組第5日給藥后V、CL、AUC0-t 無明顯差異。
　　 結(jié)果表明多劑量口服給藥后，血藥濃度呈現(xiàn)顯著的時間依賴性降低，而靜注給藥未發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象，表明自身誘導(dǎo)代謝主要影響了首過代謝過程，此外該藥在犬體內(nèi)的口服生物利用度很低，口服給藥的血藥濃度遠低于靜注給藥。
　　 三、青蒿素、雙氫青蒿素在大鼠肝微粒體代謝動力學(xué)
　　 將40只健康SD大鼠分為8組（完全空白組、口服溶劑對照組、ART 多劑量口服組、DHA 多劑量口服

13、組、ART 多劑量靜注組、DHA 多劑量靜注組、ART 靜注溶劑對照組、DHA 靜注溶劑對照組），連續(xù)給藥5日，制備大鼠肝微粒體。
　　 應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用分析方法考察青蒿素、雙氫青蒿素在不同處理組鼠肝微粒體中的孵化情況。通過藥物和肝微粒體孵化一定時間后剩余藥物濃度，計算代謝率。青蒿素與完全空白組、口服溶劑對照組、ART 靜注溶劑對照組、ART 多劑量口服組及ART 多劑量靜注組微粒體中孵化60min后，代謝率分別為35.3％、37.