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1、目的:
建立三種抗腫瘤藥物(紫杉醇、5-氟尿嘧啶和阿霉素)的高效液相色譜(HPLC)的檢測(cè)方法;考察軟堅(jiān)散結(jié)方(下文將”軟堅(jiān)散結(jié)方劑”均改為”RJ”)分別聯(lián)合三種抗腫瘤藥物后,對(duì)其在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為的影響進(jìn)行研究,為臨床聯(lián)合用藥提供參考。建立艾氏腹水癌(實(shí)體)腫瘤動(dòng)物模型,考察軟堅(jiān)散結(jié)方對(duì)紫杉醇組織分布(包括腫瘤組織內(nèi))的影響,探討軟堅(jiān)散結(jié)方減毒增效作用可能的機(jī)制。
方法:
1、分別建立大鼠血漿中紫杉醇
2、、5-氟尿嘧啶和阿霉素的HPLC檢測(cè)方法,并對(duì)其進(jìn)行專(zhuān)屬性、精密度、準(zhǔn)確度、回收率和穩(wěn)定性的驗(yàn)證。
2、研究RJ對(duì)大鼠體內(nèi)紫杉醇、5-氟尿嘧啶和阿霉素的藥代動(dòng)力學(xué)的影響。分別將SD大鼠隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,以大鼠腹腔注射紫杉醇、5-氟尿嘧啶和阿霉素為對(duì)照組,RJ灌胃聯(lián)合腹腔注射紫杉醇、5-氟尿嘧啶和阿霉素為實(shí)驗(yàn)組,于RJ灌胃給藥7天后分別腹腔注射紫杉醇(15mg/kg),5-氟尿嘧啶(50mg/kg)和阿霉素(40mg/kg
3、),于設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)采血,通過(guò)HPLC方法分別測(cè)定血漿中紫杉醇、5-氟尿嘧啶和阿霉素的含量,并進(jìn)行相關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算與比較,評(píng)價(jià)RJ分別對(duì)大鼠體內(nèi)紫杉醇、5-氟尿嘧啶和阿霉素的藥代動(dòng)力學(xué)的影響。
3、研究RJ對(duì)荷瘤小鼠體內(nèi)紫杉醇組織分布的影響。成功建立小鼠荷瘤模型,將荷瘤動(dòng)物分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組小鼠軟堅(jiān)散結(jié)方劑灌胃7天后,連同對(duì)照組,腹腔注射紫杉醇,于設(shè)定時(shí)間點(diǎn)解剖心臟、肝臟、腎臟和腫瘤組織,HPLC法檢測(cè)組織中紫杉醇
4、的含量,并進(jìn)行組織分布的比較。
結(jié)果:
1、本實(shí)驗(yàn)建立的大鼠血漿中紫杉醇、5-氟尿嘧啶和阿霉素的HPLC檢測(cè)方法,專(zhuān)屬性好,無(wú)雜質(zhì)峰干擾,色譜峰分離完全。線性關(guān)系良好,線性范圍分別為0.01-50μg·mL-1,0.1-100μg·mL-1,0.03-20μg·mL-1,日內(nèi)、日間精密度均小于15%,回收率均大于64%,凍存條件下的穩(wěn)定性好,RSD均小于10%。
2、對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組的紫杉醇相關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)
5、,除Tmax外,即實(shí)驗(yàn)組Tmax=0.7500,對(duì)照組Tmax=1.0417具有顯著差別外,其他相關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)無(wú)明顯影響。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中5-Fu相關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中阿霉素相關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)除Cmax,Tmax具有顯著性差別外,其他藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
3、在給藥達(dá)峰時(shí)間后,紫杉醇在小鼠體內(nèi)心臟、肝臟、腎臟的組織分布來(lái)看,對(duì)照組動(dòng)物心臟和腎臟中紫杉醇含量多于實(shí)驗(yàn)組,而實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物瘤體內(nèi)的
6、紫杉醇含量多于對(duì)照組。
結(jié)論:
1、本實(shí)驗(yàn)分別建立的大鼠血漿樣品中紫杉醇、5-氟尿嘧啶、阿霉素的HPLC分析檢測(cè)方法以及小鼠組織樣品中紫杉醇HPLC分析檢測(cè)方法,其操作簡(jiǎn)便快捷,專(zhuān)一性好,靈敏度高,符合紫杉醇、5-Fu、阿霉素的體內(nèi)分析的要求,適用于嚙齒類(lèi)動(dòng)物體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布的測(cè)定。
2、實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比,RJ能夠降低腹腔注射紫杉醇吸收進(jìn)入血液的速率,但不影響紫杉醇從血液中清除的速率,且RJ能夠降
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