多晶型藥物美托拉宗合成及藥動學研究.pdf

1、同一種元素或化合物在不同條件下生成結(jié)構(gòu)、形態(tài)、物性完全不同的晶體的現(xiàn)象稱為多晶現(xiàn)象。而藥物不同固態(tài)晶格中的不同填充、排列方式將影響藥物在人體內(nèi)吸收的速度和程度，進而導致臨床藥效的差異。晶型是影響藥物生物利用度的最主要因素之一，也正因此優(yōu)化制劑工藝、優(yōu)化結(jié)晶條件，研究藥物晶型與生物利用關系成為近年來藥物制劑領域研究的熱點和焦點。
　　美托拉宗，一種利尿劑，最早于1974年由美國Pennwalt公司制造在英國和美國上市，隨后，在德、意

2、、日、瑞士和阿根廷等許多國家上市，在臨床使用已達三十年，被美國藥典23、24、25版收載。美托拉宗的商品名為Zaroxolyn?或Diulo?(規(guī)格：2.5mg、5mg、10mg)；2001年8月10日，由FDA批準CelltechPharmaceuticals.Inc公司生產(chǎn)Mykrox?(規(guī)格：0.5mg)并上市。兩種產(chǎn)品的最主要的區(qū)別是新產(chǎn)品使用的美托拉宗原料的晶型與早期生產(chǎn)的原料不同，所以Mykrox吸收快，其生物利用度與Zar

3、oxolyn?和Diulo?相比有明顯的提高；Mykrox?達峰濃度時間是2～4h，而美托拉宗的其他規(guī)格達峰濃度時間是8h。Mykrox?的優(yōu)點是半衰期、作用時間較長，分別達8h、12～24h；而且不抑制碳酸酐酶，從而不影響H+和氨的分泌，血氨降低；對腎功能不全病人，其與吲達帕胺要比其它噻嗪類藥物略勝一籌。
　　正是由于美托拉宗的上述優(yōu)點，本課題組與西安力邦制藥有限公司合作共同開發(fā)了美托法宗片(規(guī)格：0.5mg)，其小試、放大工藝

4、成熟穩(wěn)定，且無知識產(chǎn)權限制，產(chǎn)品質(zhì)量達到美國藥典要求，現(xiàn)已獲得臨床研究批件。本次試驗目的是優(yōu)化美托拉宗生產(chǎn)工藝及結(jié)晶條件，考察美托拉宗不同晶型與生物利用度的關系，闡明其在中國人體內(nèi)吸收、分布、代謝、排泄的規(guī)律，為美托法宗Ⅱ期臨床試驗的給藥方案提供依據(jù)。
　　一、美托拉宗合成及結(jié)構(gòu)鑒定
　　目的：探索美托拉宗合成路線，并對美托拉宗結(jié)構(gòu)及晶型進行確證。
　　方法：以2-甲基-5氯苯胺為起始原料，經(jīng)乙?；?、氯磺化、氨解、氧化

5、、縮醛反應制得美托拉宗。并采用紅外光譜（IR）、核磁共振氫譜（NMR）、質(zhì)譜（MS）、示差掃描量熱法等方法對其結(jié)構(gòu)及晶型進行確證。
　　結(jié)果：最后美托拉宗的回收率為84.5％，物料基本平衡。元素分析結(jié)果顯示：分子中原子個數(shù)比C:H:N:S:Cl:O=16:16:3:1:1:3得美托拉宗最簡化式為C16H16N3SClO3，式量為365；由MS得美托拉宗分子量為365，故可知美托拉宗最簡化式即為分子式。計算分子中不飽和度Ω為10與分

6、子中存在6個雙鍵、3個環(huán)、1個羰基相符合。IR分析結(jié)果顯示：美托拉宗分子結(jié)構(gòu)中主要官能團有苯環(huán)、羰基、氨基、磺?；?、氯原子等，IR圖譜中各官能團特征吸收明顯，與美托拉宗結(jié)構(gòu)相符。NMR分析結(jié)果顯示：從美托拉宗結(jié)構(gòu)上看，存在1個手性碳原子，加上二氫嘧啶酮環(huán)的椅式構(gòu)型反轉(zhuǎn)造成的構(gòu)象異構(gòu)，分子中各C、H原子化學環(huán)境復雜，僅從13C-NMR、1H-NMR圖譜不易分解，結(jié)合DEPT、HMBC、HMQC等聯(lián)合進行解析，確認為美托拉宗分子的C、H分布

7、。MS分析結(jié)果看MS圖譜中得到的美托拉宗分子離子峰[M+]365，主要裂解發(fā)生在苯環(huán)及二氫嘧啶酮環(huán)上，裂解途徑與美托拉宗分子結(jié)構(gòu)相符。
　　結(jié)論：本研究室合成的美托拉宗純度較高，產(chǎn)率較高，具有產(chǎn)業(yè)化前景，且IR、NMR、MS對美托拉宗結(jié)構(gòu)進行解析，并與國外對照品進行了比對，可確認結(jié)構(gòu)為7-氯-1,2,3,4-四氫-2-甲基-3-(2-甲基苯基)-4-氧代-6-喹唑磺酰胺。
　　二、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定血槳中美托拉宗濃度及

8、其藥動學的應用
　　目的：建立快速、靈敏的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜血漿中定性定量檢測方法，并基于此方法研究美托拉宗片單次及多次給藥后在中國健康人體內(nèi)的藥代動力學特征，為制訂美托拉宗Ⅱ期臨床試驗的給藥方案提供依據(jù)。
　　方法：選用AgilentTC-C18(5μm,4.6×150mmID,Aglient)的色譜柱，流動相為甲醇-去離子水（70:30，V/V）；流速為0.5ml·min-1，柱溫：35℃，三重四極桿質(zhì)譜以多反應監(jiān)測方式

9、進行檢測。檢測離子為：美托拉宗，[M-H]-離子，m/z364.1→257，氫氯噻嗪，[M-H]-離子，m/z296.2→269.1。30名健康受試者隨機分為3組，每組10人，分別參加美托拉宗單次（0.5mg、1mg、2mg），在給藥后的0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、12.0、24.0、36.0、48.0h分別采集靜脈血約5ml,離心分離出血漿置無菌試管中，置于-80℃冰箱中保存，用HPLC/M

10、S/MS法測定血漿中美托拉宗的濃度，計算藥動學參數(shù)。單次給藥中劑量組繼續(xù)參加多次藥代動力學（1mg）研究。
　　結(jié)果：美托拉宗線性范圍為0.050-100.0ng·ml-1；低、中、高三個濃度質(zhì)控批內(nèi)精密度為3.5～8.9％，批間精密度為5.7～8.5％，準確度為93.4～110.8％；提取回收率為70.5～72.6％?？诜劳欣?.5mg、1mg以及2mg后，美托拉宗的消除半衰期t1/2為6.6±2.8h、7.9±1.2h、7

11、.6±1.9h，AUC0-48為32.9±9.2ng?h?ml-1、122.5±36.3ng?h?ml-1、162.4±26.9ng?h?ml-1，達峰時間Tmax分別為1.6±0.9h、1.6±0.6h以及1.5±1.3h和達峰濃度Cmax分別為6.9±2.6ng?ml-1、20.6±4.8ng?ml-1以及36.8±7.1ng?ml-1。多次口服美托拉宗，穩(wěn)態(tài)平均血藥濃度Cssav為9.7±1.8ng?ml-1，穩(wěn)態(tài)血藥濃度波動度D

12、F為2.1±0.3，蓄積常數(shù)R為74.9±5.2％，消除半衰期t1/2為8.9±1.4h，MRT為8.5±1.0h，AUC0-τ為(156.8±31.6)ng?h?ml-1，達峰時間Tmax和達峰濃度Cmax分別為2.4±1.4h和22.4±5.0ng?ml-1。
　　結(jié)論：在0.5～2mg劑量范圍內(nèi)美托拉宗的AUC(0-48)、Cmax均與劑量呈一定線性關系。連續(xù)7天給藥，體內(nèi)無蓄積。推薦臨床劑量為0.5mg，每天1次，如療效欠

13、佳，增大劑量為0.5mg，每天2次。
　　三、高效液相色譜熒光法測定尿液中美托拉宗及其藥動學的應用
　　目的：建立快速、靈敏的液相色譜法尿液中美托拉宗定量檢測方法，并基于此方法研究美托拉宗片單次給藥后在中國健康人體內(nèi)的藥動學特征，為制訂美托拉宗Ⅱ期臨床試驗的給藥方案提供依據(jù)。
　　方法：選用AgilentTC-C18(5μm,4.6×150mmID,Aglient)的色譜柱，流動相為甲醇-去離子水（43:57，V/V）

14、；流速為1.0ml·min-1，柱溫：35℃；熒光檢測器檢測，美托拉宗：激發(fā)波長235nm，發(fā)射波長410nm；地西泮：激發(fā)波長235nm，發(fā)射波長354nm。30名健康受試者隨機分為3組，每組10人，分別參加美托拉宗單次（0.5mg、1mg、2mg）研究，收集單次給藥前(0h)及服藥后0-2、2-4、4-6、6-8、8-10、10-12、12-16、16-24、24-48h各時間段所有尿液，記錄各時段尿量后，留取3ml尿樣于-80℃避

15、光保存待測。
　　結(jié)果：美托拉宗線性范圍為0.2-500.0ng·ml-1；低、中、高三個濃度質(zhì)控批內(nèi)精密度為6.9～11.7％，批間精密度為6.9～11.0％，準確度為100.3～108.8％；提取回收率為77.9～81.7％。單次口服美托拉宗0.5mg、1mg、2mg后48小時的美托拉宗平均尿藥累積排泄率(％)分別為59.7±16.4％、61.1±24.3％和62.3±14.4％，估算美托拉宗的消除半衰期t1/2為8.6±2.