美托拉宗血藥濃度測定方法的建立及其藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、目的：建立人血液中美托拉宗濃度的測定方法并探討其在健康中國人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征。 方法：取全血樣品200μL，加入內(nèi)標(biāo)100μL，用2.5 mL乙醚萃取，渦流混合1.O min，離心10 min(3000 r·min<'-1>)，上層有機(jī)相40℃水浴下?lián)]干，殘留物用1.0 mL流相動(dòng)溶解，進(jìn)樣5 μL用于LC-MS／MS分析。色譜柱為SymmeTtryShieldRP18分析柱(3.5 μm，20 mm×2.1 mm)；C18

2、保護(hù)柱(5μm，4 mm×3.0 mm)：流動(dòng)相為：乙腈：水(含O.2％甲酸)=50：50(v／V)；進(jìn)樣量：5μL。離子源為大氣壓化學(xué)離子化(APCI)源；檢測方式為正離子多離子反應(yīng)監(jiān)測(MRM)。用于定量分析的離子反應(yīng)分別為，m/z 366→，m/z 259(美托拉宗)，m/z 316→ m/z 270(內(nèi)標(biāo)，氯硝西泮)。 30名健康受試者，男女各半，按照體重指數(shù)隨機(jī)分為3組，分別單劑量口服2.5，7.5和20 mg 3個(gè)

3、劑量的美托拉宗片，于服藥前及服藥后0.33，0.67，1，1.5，2，3，4，6，8，10，12，16，24，36及48 h分別從肘靜脈取血2 mL，置肝素抗凝管中混勻，-20℃冷凍保存至用。受試者于每次采血前監(jiān)測并記錄血壓和心率值；另于0、1、2、4、8、12、24、36及48 h分別多取肘靜脈血2 mL測定血清中鈉、鉀、氯離子。采用液相色譜.串聯(lián)質(zhì)譜法測定受試者全血中美托拉宗的濃度。用DAS 1.0軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，用sPSS 1

4、1.5進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析，T<,max>和C<,max>取實(shí)測值；其它參數(shù)均由房室模型方法獲得：t<,1/2>=0.693/λ<,z>，λ<,z>為消除速率常數(shù)，由對(duì)數(shù)血藥物濃度.時(shí)間曲線末端直線部分斜率求得；以梯形法計(jì)算AUC<,0-t>，AUC<,t-∞>=C<,t>/λ<,z>，AUC<,t-∞>=AUC<,0-t>+AUC<,t-∞>，CL/F=給藥劑量/AUC<,0-∞>,V<,d>=CL/F/λ<,z>。 結(jié)果

5、：本條件下美托拉宗及內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別約為0.75 min和0.91 min，全血中內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)樣品測定無干擾。美托拉宗的線性范圍均為0.5～1000 ng·mL<'-1>，最低定量濃度為0.5 ng·mL<'-1>，提取回收率均大于78％，日內(nèi)、日間RSD均小于6％。美托拉宗全血樣品在室溫放置4 h、處理后室溫放置24 h、凍融3次及.20℃保存1周等條件下均較穩(wěn)定。 美托拉宗的體內(nèi)經(jīng)時(shí)過程符合有滯后時(shí)間的二房室模型，2.5

6、，7.5和20 mg 3個(gè)劑量組的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)如下：達(dá)峰時(shí)間(Tmax)分別為(2.2±0.5)，(2.2±0.8)和(2.5±0.8)h；血藥濃度峰值(C<,max>)分別為(36.1±6.5)，(98.6±26.8)和(264.3±64.6)μg·L<'-1>；平均藥時(shí)曲線下面積(AUC<<0-∞>)分另IJ為(220.6±26.0)，(609.9±131.5)和(1709.2±327.0)μg·h·L<'-1>；吸收半衰期(

7、t<,1/2Ka>)分別為(0.83±0.18)、(0.95±0.77)和(0.84±0.62)h；平均消除半衰期(t<,1/2β>)分別為(13.06±9.34)、(8.93±4.35)和(14.51±12.93)h；平均滯后時(shí)間’(1agtime，f l醒)分別為(0.51±0.33)、(0.38±0.16)和(0.41±0.13)h：平均總清除率(CL/F)分別為(0.00021±0.00003)、(0.00034±0.00021

8、)和(0.00027±0.00009)L·h<'-1>·kg<'-1>；平均表觀分布容積(V/F)分別為(0.0038±0.0027)、(0.0039±0.0019)和(0.005 1±0.0039)L·kg<'-1>。 單劑量口服美托拉宗片的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)符合有滯后時(shí)間的二房室模型，C<,max>和AUC與服藥劑量呈線性相關(guān)。男、女性受試者口服美托拉宗片后的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過程基本相同，但女性受試者C<,max>值較高，MRT值較低。

9、健康受試者口服美托拉宗后，受試者的收縮壓和舒張壓均有所降低；心率在服藥后8 h內(nèi)略有降低，隨后逐漸回升，并略有升高，但上述指標(biāo)的變化均在正常范圍內(nèi)。 健康受試者口服美托拉宗后血清中的鈉、鉀、氯離子的濃度均有所下降，但未超出正常范圍，個(gè)別受試者的血鉀濃度稍低于正常值下限，美托拉宗對(duì)鈉和氯離子血清濃度的影響存在性別差異。 結(jié)論：本文建立了高效液相色譜．串聯(lián)質(zhì)譜測定人全血中美托拉宗的方法，該方法靈敏、準(zhǔn)確、快速、無雜質(zhì)干擾，

10、且樣品處理簡單，便于美托拉宗的藥代動(dòng)力學(xué)研究應(yīng)用。 本研究首次報(bào)道了美托拉宗片在中國健康人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，健康人單劑量口服美托拉宗片的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)符合有滯后時(shí)間的二房室模型，C<,max>和AUC與服藥劑量呈線性相關(guān)。男、女性受試者口服美托拉宗片后的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過程基本相同，但女性受試者C<,max>值較高，MRT值較低。 不同劑量美托拉宗對(duì)男女健康受試者血壓、心率及電解質(zhì)離子血清濃度的影響不同，但上述指標(biāo)的變化均在正