MSU納晶毒性的細(xì)胞水平研究與復(fù)方美托拉宗纈沙坦的藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、本文第一部分內(nèi)容研究的是納米材料的細(xì)胞毒性問(wèn)題。納米材料安全性問(wèn)題成為制約納米技術(shù)在生物醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用的巨大壁壘，闡明納米毒性機(jī)制是解決納米安全應(yīng)用的關(guān)鍵。然而關(guān)于這個(gè)問(wèn)題，國(guó)際科學(xué)界尚沒(méi)有明確的答案。雖然納米材料的尺寸、表面效應(yīng)是目前納米毒性機(jī)制的主流觀點(diǎn)，但是這種學(xué)說(shuō)并不能揭示納米毒性規(guī)律以及對(duì)納米材料應(yīng)用產(chǎn)生指導(dǎo)意義。新學(xué)說(shuō)“物理?yè)p傷是納米毒性的根源”，剖析納米毒性的本質(zhì)，從理論上系統(tǒng)論證了納米材料與生物系統(tǒng)相互作用的規(guī)律。

2、　　第一部分研究試圖通過(guò)尿酸鹽生物學(xué)模型，探討由尿酸鹽引發(fā)的痛風(fēng)是源于尿酸鈉分子的化學(xué)毒性還是尿酸鹽納米結(jié)晶的物理?yè)p傷，從而揭示納米毒性的本質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)濃度控制形成尿酸鈉針狀納晶（25nm和135 nm），然后將尿酸鈉針狀納晶和尿酸鈉溶液分別作用于RAW264.7和 Hep G2模型，利用MTT法、LDH法、ROS染色以及凋亡壞死實(shí)驗(yàn)比較MSU納晶和溶液對(duì)細(xì)胞的損傷影響，并用換液和溫度控制等方法進(jìn)行細(xì)胞恢復(fù)實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證。
　　結(jié)

3、果顯示，MSU溶液對(duì)HepG2細(xì)胞和RAW264.7細(xì)胞沒(méi)有存活率、膜通透性、凋亡壞死等方面損傷作用，也不會(huì)造成細(xì)胞內(nèi) ROS水平上升；而 MSU納晶可降低HepG2細(xì)胞和RAW264.7細(xì)胞的存活率、影響膜通透性、升高ROS水平、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡壞死；并且當(dāng)MSU納晶溶解后細(xì)胞存活率又有所改善。
　　結(jié)果表明MSU納晶對(duì)細(xì)胞造成的損傷很大程度與MS U的狀態(tài)（分子或粒子）有關(guān)，這種由粒子實(shí)體而非化學(xué)本質(zhì)帶來(lái)的顆粒模式毒性是一種新的損

4、傷模式-物理?yè)p傷，它與生命體系之間的相互作用是屬于物理反應(yīng)范疇而不是化學(xué)反應(yīng)。而物理?yè)p傷在某些條件下是可修復(fù)的，如實(shí)體粒子溶解、降解或消失，但是若粒子最初的物理?yè)p傷引發(fā)了后續(xù)的不可逆的生化反應(yīng)，其毒性問(wèn)題將復(fù)雜化，不在本部分討論范圍內(nèi)。
　　本文第二部分內(nèi)容研究的是制劑的藥代動(dòng)力學(xué)以及其生物利用度問(wèn)題。抗高血壓藥物的聯(lián)合應(yīng)用是一種主流的趨勢(shì)，因?yàn)槁?lián)合治療相對(duì)于單藥治療具有安全有效降壓，減少不利效應(yīng)，更好的保護(hù)靶器官，提高患者的依從

5、性等優(yōu)點(diǎn)。本課題組首次選用喹唑啉類(lèi)利尿藥美托拉宗和血管緊張素受體拮抗劑類(lèi)藥物纈沙坦作為模型藥物，制備了MV單片復(fù)方制劑。
　　為對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)本部分內(nèi)容首先利用HP LC-MS/MS建立了同時(shí)測(cè)定比格犬血漿中美托拉宗和纈沙坦?jié)舛鹊姆椒?，?duì)其進(jìn)行驗(yàn)證后應(yīng)用于非臨床藥代動(dòng)力學(xué)及生物利用度研究。
　　結(jié)果顯示，美托拉宗、纈沙坦的線(xiàn)性范圍分別為0.5～100 ng/ml及5～5000 ng/ml，相關(guān)系數(shù) R2分別為0.9937和0.

6、9939，批內(nèi)精密度分別為2.09％～8.85%和2.36%～13.12%，基質(zhì)效應(yīng)分別為87.73%～98.62%和99.03%～137.35%，回收率分別為75.74%～81.82%和83.89%～95.64%。
　　比格犬給予參比制劑后，美托拉宗的Tma x為1.08±0.20 h，C ma x為30.91±3.49 ng/ml，AUC(0-t)為153.53±36.17 ng/ml·h；比格犬給予試驗(yàn)制劑后，美托拉宗的Tm

7、ax為1.00±0.56 h，Cmax為28.59±9.47 ng/mL，AUC(0-t)為162.27±72.12 ng/ml·h。參比制劑和試驗(yàn)制劑的Tmax、Cmax和AUC(0-t)沒(méi)有顯著差異。參比制劑給藥后美托拉宗的t1/2和MRT(0-t)分別為3.49±0.74 h和4.41±0.91 h；試驗(yàn)制劑給藥后美托拉宗的t1/2和MRT(0-t)分別為3.74±0.74 h和5.02±1.35 h，參比制劑和試驗(yàn)制劑的t1/2

8、和MRT(0-t)沒(méi)有顯著差異。
　　比格犬給予參比制劑后，纈沙坦的Tma x為1.17±0.91 h，C ma x為6605.01±1356.79 ng/ml， AUC(0-t)為24490.36±3587.24 ng/ml·h；比格犬給予試驗(yàn)制劑后，纈沙坦的Tmax為1.78±1.05 h，Cmax為6288.97±2802.22 ng/mL，AUC(0-t)為24422.48±4520.86 ng/ml·h。參比制劑和試驗(yàn)制

9、劑的Tmax、Cmax和AUC(0-t)沒(méi)有顯著差異。參比制劑給藥后纈沙坦的t1/2和MRT(0-t)分別為2.36±0.69 h和3.86±0.31 h；試驗(yàn)制劑給藥后纈沙坦的t1/2和MRT(0-t)分別為2.27±0.14 h和3.94±0.27 h，兩個(gè)藥物參比制劑和試驗(yàn)制劑的t1/2和MRT(0-t)無(wú)顯著差異。
　　結(jié)果表明，所建立的方法特異性好、定量限低、準(zhǔn)確度高、精密度好，符合藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)要求。比格犬口服給藥自制

10、制劑復(fù)方美托拉宗纈沙坦和參比制劑美托拉宗片和纈沙坦氫氯噻嗪片后，美托拉宗和纈沙坦在體內(nèi)消除快，擬合的血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)均符合無(wú)時(shí)滯的一級(jí)消除一房室模型，說(shuō)明兩個(gè)藥物的試驗(yàn)制劑和參比制劑均具有速釋的特性。兩個(gè)藥物試驗(yàn)制劑和參比制劑t1/2、MRT(0-t)、Cmax、Tmax、AUC(0-t)之間無(wú)顯著差異，說(shuō)明兩種制劑中的藥物具有相似的藥代動(dòng)力學(xué)特性。自制制劑相對(duì)于市售制劑的美托拉宗平均相對(duì)生物利用度（AUC）為108.54±41.54