導(dǎo)赤承氣湯治療大腸桿菌致的大鼠急性腎盂腎炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過不結(jié)扎輸尿管直接膀胱注射大腸桿菌的方法制作大鼠APN(急性腎盂腎炎)模型，觀察各組大鼠腎臟組織以及體溫、尿量、腎重系數(shù)、血常規(guī)、尿常規(guī)、尿細(xì)菌培養(yǎng)、血清白介素-2（IL-2）、血清 C反應(yīng)蛋白（CRP）、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）和分泌型免疫球蛋白（SIgA）各項(xiàng)指標(biāo)的變化，從而以實(shí)驗(yàn)的方法探討導(dǎo)赤承氣湯對(duì) APN的影響及其作用機(jī)制，以期為中醫(yī)臨床應(yīng)用和教學(xué)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。急性腎盂腎炎(APN)是由各種病原微生物感染直

2、接引起腎小管、腎間質(zhì)和腎實(shí)質(zhì)的炎癥。臨床常見畏寒發(fā)熱、惡心嘔吐、尿頻、尿急、尿痛,小腹部的脹痛,腰部疼痛,肋脊角壓痛及叩痛等。其基本的病理特點(diǎn)在于腎盂腎盞黏膜充血水腫,表面膿性分泌物,腎皮質(zhì)有炎癥病灶,腎小管上皮腫脹、脫落壞死,間有白細(xì)胞浸潤(rùn)等,炎癥愈后有瘢痕形成等，但腎小球一般較少受損。在古醫(yī)籍中雖未見明確的關(guān)于 APN的記載,但根據(jù)其臨床有身熱,腹?jié)M,便秘、口干、唇裂,伴見小便涓滴不暢,溺時(shí)疼痛,尿色紅赤,時(shí)煩渴,舌紅脈數(shù)等癥候，將

3、其歸屬于中醫(yī)“淋證”、“癃閉”、“虛勞腰痛”等范疇。并中醫(yī)從“腎與膀胱相表里”這一體現(xiàn)臟腑相關(guān)整體觀的理論出發(fā),將其病機(jī)特點(diǎn)概括為“腎虛膀胱熱”。根據(jù)APN的中醫(yī)病機(jī)特點(diǎn)，依據(jù)“腎與膀胱相表里”的理論及中醫(yī)藥的現(xiàn)代藥理研究,選用導(dǎo)赤承氣湯對(duì)大腸桿菌所致APN大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。導(dǎo)赤承氣湯出自吳鞠通《溫病條辨·中焦篇》第17條:“左脈牢堅(jiān)，小便赤痛，時(shí)煩渴甚，導(dǎo)赤承氣湯主之?！北痉郊茨芡a大便,又能通利小便,可兩解大腸與小腸之邪熱,為“二腸

4、同治”之法。臨床用于陽明腑實(shí)兼小腸熱盛證。而小腸熱盛，下注膀胱，小便必涓滴不暢。因此，對(duì)于APN可以采用導(dǎo)赤承氣湯甘苦化陰利小便與攻下合法而起到清熱瀉火、利濕通淋的作用。本研究通過觀察大鼠腎臟組織以及體溫、尿量、腎重系數(shù)、血常規(guī)、尿常規(guī)、尿細(xì)菌培養(yǎng)、血清白介素-2（IL-2）、血清C反應(yīng)蛋白（CRP）、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)和分泌型免疫球蛋白（SIgA）各項(xiàng)指標(biāo)的變化，明確導(dǎo)赤承氣湯治療 APN的作用機(jī)制，為臨床治療APN

5、和中醫(yī)教學(xué)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：⑴選用健康清潔級(jí)雄性SD大鼠28只，體重250±20g，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，試驗(yàn)期間自由飲水，進(jìn)食普通飼料，按照隨機(jī)分配原則分為4組：空白組（Normal control group,K=n6）、模型組（Model group,M=n6）、導(dǎo)赤承氣湯組（ Daochichengqi Decoction group,D=n8）、左氧氟沙星組（Levofloxacin Hydrochloride gro

6、up,L=n8），其中除空白組外，其余各組均采用不結(jié)扎輸尿管直接膀胱注射大腸桿菌（0.6ml）的方法制作APN大鼠模型，于實(shí)驗(yàn)造模后第5天處死。⑵實(shí)驗(yàn)給藥：四組均在造模后連續(xù)給藥5天，給藥劑量按人與大鼠間藥物折算比例系數(shù)計(jì)算得出，D組以4.9g/kg/d導(dǎo)赤承氣湯灌胃，L組以0.06g/kg/d左氧氟沙星灌胃，K組和M組分別給予等量生理鹽水灌胃，每天灌胃給藥一次，給藥容積為8ml/kg/d。⑶指標(biāo)檢測(cè)：每日上午九點(diǎn)，用電子體溫計(jì)測(cè)量大鼠

7、的肛溫；第4天將老鼠放置于代謝籠中，收集24小時(shí)尿量，觀察各組間尿量的變化；處死時(shí)稱體重、腎重，用于計(jì)算腎重系數(shù)；從腹主動(dòng)脈取血，檢測(cè)大鼠血常規(guī)、血清白介素-2（IL-2）、血清 C反應(yīng)蛋白（CRP）各項(xiàng)指標(biāo)的變化；無菌狀況下從膀胱抽取尿液，檢測(cè)尿細(xì)菌培養(yǎng)、尿常規(guī)、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）和分泌型免疫球蛋白（SIgA）各項(xiàng)指標(biāo)的變化；將縱行切開的左側(cè)大部分腎臟組織置于10％多聚甲醛液中固定，脫水，石蠟包埋，行 HE染色，用于

8、光鏡下觀察腎臟結(jié)構(gòu)和變化。
　　結(jié)果：①各組大鼠指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果。體溫的測(cè)定結(jié)果，與空白組相比，模型組、導(dǎo)赤承氣湯組和左氧氟沙星組造模后體溫都呈上升趨勢(shì)，模型組體溫升高最明顯，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。與模型組相比，導(dǎo)赤承氣湯組和左氧氟沙星組體溫呈下降趨勢(shì)，且左氧氟沙星組體溫下降較明顯，但與導(dǎo)赤承氣湯組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。24小時(shí)尿量的測(cè)定結(jié)果，與空白組相比，模型組、導(dǎo)赤承氣湯組和左氧氟沙星組尿量都增加，模型組增加

9、的較為顯著，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。與模型組相比，導(dǎo)赤承氣湯組和左氧氟沙星組尿量減少，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。導(dǎo)赤承氣湯組和左氧氟沙星組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。腎重系數(shù)的測(cè)定結(jié)果，與空白組相比，模型組的左腎重系數(shù)明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。與模型組相比，導(dǎo)赤承氣湯組左/右腎重系數(shù)降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，左氧氟沙星組左/右腎重系數(shù)降低，有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。但導(dǎo)赤承氣湯組和左氧

10、氟沙星組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。血常規(guī)的測(cè)定結(jié)果，白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞的測(cè)定結(jié)果，與空白組相比，模型組白細(xì)胞水平明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。與模型組相比，左氧氟沙星組白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞水平下降，有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，導(dǎo)赤承氣湯組白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞水平下降，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。與導(dǎo)赤承氣湯組相比，左氧氟沙星組白細(xì)胞水平下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。紅細(xì)胞及血紅蛋白的測(cè)定結(jié)果，與空白組相比，

11、模型組紅細(xì)胞及血紅蛋白水平下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。但導(dǎo)赤承氣湯組、模型組和左氧氟沙星組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。血小板的測(cè)定結(jié)果，各組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。尿常規(guī)的測(cè)定結(jié)果，尿白細(xì)胞：與空白組相比，模型組尿白細(xì)胞增多，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。與模型組相比，導(dǎo)赤承氣湯組尿白細(xì)胞減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，左氧氟沙星組尿白細(xì)胞減少，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。導(dǎo)赤承氣湯組和左氧氟沙星組之間

12、無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。尿潛血：與空白組相比，模型組尿潛血增多，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。但模型組、導(dǎo)赤承氣湯組和左氧氟沙星組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。尿細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果，與空白組相比，模型組尿培養(yǎng)陽性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。與模型組相比，左氧氟沙星組尿培養(yǎng)陽性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，導(dǎo)赤承氣湯組尿培養(yǎng)陽性率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。導(dǎo)赤承氣湯組和左氧氟沙星組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。尿SIgA

13、的測(cè)定結(jié)果，與空白組相比，模型組尿SIgA水平降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。與模型組相比，導(dǎo)赤承氣湯組和左氧氟沙星組尿SIgA水平增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。與導(dǎo)赤承氣湯組相比，左氧氟沙星組尿SIgA水平較高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。尿NAG酶的測(cè)定結(jié)果，各組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。血清IL-2的測(cè)定結(jié)果，與空白組相比，模型組IL-2水平增高，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。與模型組相比，中藥組 IL-2水

14、平降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。導(dǎo)赤承氣湯組和左氧氟沙星組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。CRP的測(cè)定結(jié)果，與空白組相比，模型組CRP水平增高，有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。與模型組相比，導(dǎo)赤承氣湯組 CRP水平降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，左氧氟沙星組 CRP水平也降低，有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。但導(dǎo)赤承氣湯組和左氧氟沙星組之間無顯著差異(P>0.05)。②空白組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)完整，未見病理改變；模型組大鼠腎

15、盂粘膜下及間質(zhì)區(qū)可見到大量淋巴細(xì)胞灶性浸潤(rùn),間質(zhì)區(qū)毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，腎小管壞死；導(dǎo)赤承氣湯組和左氧氟沙星組腎組織病理變化較模型組明顯改善，大鼠腎盂粘膜下及間質(zhì)區(qū)少量淋巴細(xì)胞灶性浸潤(rùn),間質(zhì)區(qū)毛細(xì)血管輕度擴(kuò)張，腎小管輕度壞死，血管輕度充血。
　　結(jié)論：⑴導(dǎo)赤承氣湯能升高APN大鼠分泌型免疫球蛋白A（SIgA）水平，降低血中白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞（WBC、N）、血清白介素-2（IL-2）、血清C反應(yīng)蛋白（CRP）、尿白細(xì)胞水平,且減輕腎盂

16、粘膜下及間質(zhì)區(qū)中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血及間質(zhì)水腫，有一定的腎保護(hù)作用，短期治療效果與左氧氟沙星無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。證明導(dǎo)赤承氣湯對(duì)APN具有一定的治療作用。⑵導(dǎo)赤承氣湯對(duì)APN的作用機(jī)制可能與其清熱利小便通腑而起到抑菌抗炎，增強(qiáng)尿道局部免疫功能的作用有關(guān)。⑶實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)導(dǎo)赤承氣湯是通過抑菌抗炎、增強(qiáng)尿道局部免疫功能發(fā)揮其甘苦化陰利小便和攻下瀉熱作用，從而達(dá)到清熱利濕通淋的目的。為中醫(yī)教學(xué)及臨床應(yīng)用提供了