異紫堇堿在宮頸癌SiHa細胞中通過逆上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化途徑實現(xiàn)抗癌作用.pdf

1、目的：宮頸癌是全世界導致婦女死亡的最主要惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率呈明顯上升趨勢，發(fā)病年齡亦趨于年經(jīng)化。宮頸癌的治療目前仍以手術(shù)治療為主，輔以化學藥物治療和放射治療。但手術(shù)切除創(chuàng)傷較大，功能受損嚴重；放化療常常伴有嚴重的并發(fā)癥，且醫(yī)療費用昂貴，療效不甚滿意。近年來研究發(fā)現(xiàn)，HPV16亞型感染是激發(fā)宮頸上皮惡性轉(zhuǎn)化的最主要因素，但目前尚無抑制HPV基因表達和功能活性的有效方法，若能解決這一難題，將是宮頸癌防治工作的一大突破。異紫堇堿(Is

2、ocorydine，ICD)是在禿瘡花中發(fā)現(xiàn)的一種異喹啉類生物堿單體，可從植物中直接提取也可化學合成制得。已有研究發(fā)現(xiàn)異紫堇堿可以在體外抑制攜帶不同HPV亞型的人宮頸癌Hela和SiHa細胞株中E6、E7基因的表達，本文旨在研究異紫堇堿抑制HPV16E6表達的具體作用和機制，此研究的深入可能使異紫堇堿成為一種治療HPV感染和宮頸癌的新的有效中藥單體，或為以其為基礎(chǔ)設(shè)計一類新藥提供理論依據(jù)。
　　方法：體外培養(yǎng)攜帶HPV16E6的S

3、iHa細胞，利用MTT實驗初步檢測異紫堇堿對SiHa細胞活性產(chǎn)生的影響，并通過流式細胞學方法檢測處理后的SiHa細胞凋亡和細胞周期的改變。采用全基因組基因芯片表達譜技術(shù)測定異紫堇堿處理后的SiHa細胞株在轉(zhuǎn)錄基因水平上表達的改變，利用RT-PCR手段驗證芯片結(jié)果后，通過Western-blot驗證其在蛋白質(zhì)水平發(fā)生的改變。
　　結(jié)果：異紫堇堿對宮頸癌SiHa細胞增生具有明顯的抑制作用，MTT實驗結(jié)果顯示處理72h時最高抑制率可達6

4、8.69％。流式細胞術(shù)檢測結(jié)果可發(fā)現(xiàn)異紫堇堿對SiHa細胞在各個時間點及濃度的總凋亡率均在6%以下，細胞周期結(jié)果顯示發(fā)生了 G1/S期阻滯。由全基因組芯片結(jié)果中篩選出有意義的目的基因Caspase14。CLCA2，NDRG1以及CDH1均表達上調(diào)，并且經(jīng)RT-PCR驗證結(jié)果可靠，Western blot結(jié)果顯示其對應(yīng)的蛋白質(zhì)水平上表達同步升高。此外，在Western blot實驗中我們同時驗證了Vimentin、HPV16E6以及PAR