結(jié)核性腦膜炎患者LTA4H基因多態(tài)性研究.pdf

1、目的：結(jié)核性腦膜炎（Tuberculous meningitis，TBM）簡(jiǎn)稱結(jié)腦，是由結(jié)核分支桿菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)非化膿性炎癥，是結(jié)核病中最嚴(yán)重的形式，死亡率和致殘率很高。據(jù)統(tǒng)計(jì)全世界約1/3人口感染Mtb，其中10％的感染者發(fā)展為結(jié)核病，僅1%發(fā)展為 TBM。臨床上不同個(gè)體暴露在相同的病原學(xué)條件下患者罹患結(jié)核病的形式差異很大，大部分患者發(fā)生肺結(jié)核，只有一小部分發(fā)生結(jié)腦

2、，并且不同結(jié)腦患者的臨床表現(xiàn)及預(yù)后也有很大差異，提示宿主基因在結(jié)核性腦膜炎的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。在感染Mtb患者中，涉及到殺傷結(jié)核桿菌的免疫應(yīng)答基因的突變，可能使得Mtb更容易由肺部擴(kuò)散到腦組織從而引發(fā)結(jié)腦，而據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道白三烯A4水解酶（LTA4H）基因在涉及機(jī)體對(duì)結(jié)核桿菌免疫應(yīng)答平衡方面發(fā)揮重要的作用。本研究旨在探討LTA4H基因rs17525495位點(diǎn)多態(tài)性與中國(guó)結(jié)腦患者易感性的關(guān)系，并比較不同基因型患者腦脊液TNFα含量差異，

3、及不同基因型結(jié)腦患者對(duì)糖皮質(zhì)激素治療的反應(yīng)情況。
　　方法：
　　1.病例組：選擇110例結(jié)腦患者，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照國(guó)際TBM協(xié)作組2010結(jié)腦診斷專家共識(shí)中確診與很可能標(biāo)準(zhǔn)，參照英國(guó)醫(yī)學(xué)研究會(huì)（MRC）標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估其入院時(shí)病情輕重，改良Rankin評(píng)分評(píng)估其出院時(shí)預(yù)后情況。對(duì)照組為105例無血緣關(guān)系的健康體檢者，既往無結(jié)核病史及結(jié)核接觸史。
　　2.對(duì)病例組和對(duì)照組采集靜脈血液提取基因組DNA，采用基因測(cè)序的方法對(duì)LTA4H

4、基因snp位點(diǎn)rs17525495進(jìn)行檢測(cè)。
　　3.留取部分結(jié)腦患者未進(jìn)行抗結(jié)核治療前的腦脊液及部分中樞神經(jīng)系非感染性病變患者的腦脊液，應(yīng)用酶聯(lián)免疫（ELISA）方法測(cè)定腦脊液中TNFα的含量。
　　4.回顧性分析結(jié)核患者的住院資料，根據(jù)治療情況，選擇激素治療組33例，非激素治療組42例，根據(jù)改良Rankin評(píng)分（Modified Rakin Scale,MRS）來評(píng)估不同基因型患者對(duì)激素的反應(yīng)情況。
　　5.應(yīng)用S

5、PSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)照組基因型的分布符合哈迪-溫伯格平衡定律，有群體代表性。LTA4H基因型及等位基因數(shù)用直接計(jì)數(shù)法，計(jì)算各等位基因及基因型頻率，采用χ2檢驗(yàn)對(duì)組間等位基因及基因型頻率進(jìn)行比較。TNFα含量以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較用t檢驗(yàn)，多組間比較用單因素方差分析或非參數(shù)檢驗(yàn)。不同基因型對(duì)激素的反應(yīng)差異采用卡方檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　1.病例組和對(duì)照組：病例組包括110例患者，其中男

6、性77例，女性33例，平均年齡為38.6±16.8歲。健康對(duì)照組105例，其中男性65例，女性40例，平均年齡37.5±13.7歲。TBM組和對(duì)照組在性別和年齡上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.哈迪-溫伯格平衡定律檢測(cè)(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)：對(duì)照組LTA4H基rs17525495位點(diǎn)基因型頻率經(jīng)檢驗(yàn)，符合哈迪-溫伯格平衡定律(P>0.05)。
　　3.TBM組和對(duì)照組LTA4H基因rs175

7、25495位點(diǎn)等位基因及基因型頻率分布的比較：TBM組LTA4H基因rs17525495位點(diǎn)等位基因分布與對(duì)照組無明顯差異?？ǚ綑z驗(yàn)結(jié)果顯示：顯性模型，病例組LTA4H基因位點(diǎn)rs17525495基因型CT+TT頻率分布與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(OR=1.405，95%CI：0.816-2.419，P=0.221)；隱性模型，TBM組LTA4H基因位點(diǎn)rs17525495 TT型頻率分布明顯高于對(duì)照組（OR=3.092，95%CI：0.

8、964-9.914，P=0.047）。
　　4.不同病情TBM患者基因多態(tài)性分析：顯性模型，III期患者LTA4H基因 rs17525495位點(diǎn)基因型CT+TT分布頻率高于對(duì)照組（OR=2.321,95%CI：1.055-5.107，P=0.034）；隱性模型，III期患者LTA4H基因 rs17525495位點(diǎn)基因型 TT頻率分布明顯高于對(duì)照組（OR=6.546,95%CI：1.784-24.015，P=0.005）；I期和II

9、期患者在顯性、隱性遺傳模型下其基因型分布與對(duì)照組相比無明顯差異。
　　5.不同預(yù)后TBM患者基因多態(tài)性分析：顯性模型：預(yù)后好組及預(yù)后差組患者LTA4H基因rs17525495位點(diǎn)基因型CT+TT頻率與對(duì)照組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。隱性模型：預(yù)后好組患者LTA4H基因rs17525495位點(diǎn)基因型 TT頻率與對(duì)照組相比無差異。預(yù)后差組患者LTA4H基因rs17525495位點(diǎn)基因型TT頻率分布明顯高于對(duì)照組（OR=6.012,95%CI

10、：1.488-24.289，P=0.015）。
　　6.各組間TNFα水平的計(jì)較：（1）TBM組患者與對(duì)照組患者腦脊液中TNFα水平的比較，TBM組TNFα水平為12.15±1.76pg/ml，對(duì)照組TNFα水平為7.35±0.98pg/ml，TBM組TNFα含量高于對(duì)照組，P＜0.05；（2）TBM組不同病情的患者腦脊液中TNFα水平的比較，I期患者TNFα水平為8.27±1.73pg/ml，II期患者TNFα水平為9.52±2

11、.68pg/ml，III期患者TNFα水平為22.99±6.23pg/ml，I期與II期相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05，III期患者比II期患者TNFα含量高，P＜0.05，III期患者比I期患者TNFα含量高，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；（3）TBM組預(yù)后好與預(yù)后差組腦脊液中TNFα水平的比較，預(yù)后好組TNFα水平為8.80±2.25pg/ml，預(yù)后差組TNFα水平為23.28±6.80pg/ml，預(yù)后差組TNFα水平高于預(yù)后好組，P

12、＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（4）TBM組不同基因型患者腦脊液TNFα水平的比較，TBM組LTA4H基因rs17525495 CC型患者腦脊液TNFα水平為7.71±0.89pg/ml，CT型患者TNFα水平為9.68±1.42pg/ml，TT型患者TNFα水平為29.18±8.32pg/ml，CT型患者TNFα水平與TT型患者相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。TT型與CT型患者TNFα水平均比CC型高，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

13、　　7.TBM組LTA4H基因 rs17525495位點(diǎn)不同基因型患者對(duì)激素反應(yīng)情況：CC型激素治療組患者好轉(zhuǎn)率低于未使用激素組患者，P＜0.05；TT型激素治療組患者好轉(zhuǎn)率明顯高于未使用激素治療組患者，P＜0.05；CT型激素治療組與未激素治療組患者的好轉(zhuǎn)率相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異
　　結(jié)論：
　　1.LTA4H基因rs17525495位點(diǎn)基因型TT可能增加結(jié)腦發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，攜帶有TT型基因患者更傾向有較嚴(yán)重的疾病且預(yù)后較差。