基于mTOR信號(hào)通路研究高原記憶損傷及其藥物防治.pdf

1、目的：
　　1.研究 mTOR信號(hào)通路與高原記憶損傷的關(guān)系，并探討 L-亮氨酸對(duì)高原記憶損傷的改善作用。
　　2.探討蘚生馬先蒿苯乙醇苷對(duì)高原記憶的改善作用，及其對(duì)mTOR信號(hào)通路的影響。
　　方法：
　　1.通過(guò)八臂迷宮成功篩選的昆明小鼠隨機(jī)分為常氧對(duì)照組、缺氧組、L-亮氨酸低劑量組（0.473 g/kg）、L-亮氨酸中劑量組（0.945 g/kg）、L-亮氨酸高劑量組（1.89 g/kg）。灌胃給藥1周，給藥

2、第四天，缺氧組和L-亮氨酸低、中、高劑量組置于大型低壓氧艙模擬高原低壓低氧環(huán)境（7500 m，3 d）。采用八臂迷宮測(cè)試其空間學(xué)習(xí)記憶能力；蘇木精-伊紅（HE）染色觀察各組海馬CA1區(qū)細(xì)胞形態(tài)變化；SYBR Green實(shí)時(shí)定量 PCR檢測(cè)海馬組織中 mTOR、P70S6K和4E-BP1 mRNA的表達(dá)。
　　2.通過(guò)八臂迷宮成功篩選的Wistar大鼠隨機(jī)分為常氧對(duì)照組、缺氧組、苯乙醇苷低劑量組（50 mg/kg）、苯乙醇苷中劑量組

3、（200 mg/kg）、苯乙醇苷高劑量組（400 mg/kg）及陽(yáng)性對(duì)照組（1.35 g/kg）。灌胃給藥1周，給藥第四天，缺氧組、陽(yáng)性對(duì)照組和苯乙醇苷低、中、高劑量組置于大型低壓氧艙模擬高原低壓低氧環(huán)境（7500 m，3 d）。采用八臂迷宮測(cè)試其空間學(xué)習(xí)記憶能力；蘇木精-伊紅（HE）染色觀察各組海馬CA1區(qū)細(xì)胞形態(tài)變化；生化法測(cè)定海馬組織中MDA、ROS含量和GSH、SOD酶活力；SYBR Green實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)海馬組織中mTO

4、R、P70S6K和4E-BP1 mRNA的表達(dá)；Western blot檢測(cè)海馬組織中p-mTOR、p-P70S6K、p-4E-BP1及Caspase-3蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1. L-亮氨酸藥物干預(yù)，高原低壓低氧暴露后，與常氧對(duì)照組比較，缺氧組RME、TE及TT均顯著性增加；海馬CA1區(qū)神經(jīng)元損傷加重；mTOR和P70S6K mRNA表達(dá)均顯著性下調(diào)，4E-BP1 mRNA表達(dá)顯著性上調(diào)。與缺氧組比較，L-亮氨酸低、

5、中劑量組WME、RME、TE、TT和4E-BP1 mRNA表達(dá)均有降低趨勢(shì)，mTOR、P70S6K mRNA表達(dá)有增加趨勢(shì)；L-亮氨酸高劑量組WME、RME、TE和TT均顯著性降低，mTOR、P70S6K mRNA表達(dá)均顯著性上調(diào)；L-亮氨酸低、中、高劑量組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元損傷明顯減輕。
　　2.苯乙醇苷藥物干預(yù)，高原低壓低氧暴露后，與常氧對(duì)照組比較，缺氧組WME、RWE、TE、TT均顯著性增加；海馬CA1區(qū)神經(jīng)元損傷加重；MD

6、A含量顯著性升高，GSH、SOD酶活力均顯著性降低；mTOR、P70S6K mRNA表達(dá)均顯著性下調(diào)，4E-BP1 mRNA表達(dá)顯著性上調(diào)；p-mTOR、p-P70S6K蛋白表達(dá)均顯著性降低，p-4E-BP1、 Caspase-3蛋白表達(dá)均顯著性升高。與缺氧組比較，苯乙醇苷各給藥組及陽(yáng)性對(duì)照組WME、RWE、TE及TT均顯著性降低；ROS、MDA、GSH、SOD和CA1區(qū)神經(jīng)元均顯著性改善；mTOR、P70S6K mRNA表達(dá)顯著性上調(diào)

7、，4E-BP1 mRNA表達(dá)顯著性下調(diào)；p-mTOR、p-P70S6K蛋白表達(dá)顯著性升高，p-4E-BP1、 Caspase-3蛋白表達(dá)顯著性降低。
　　結(jié)論：
　　1. mTOR信號(hào)通路在高原記憶損傷中起到重要作用，且L-亮氨酸對(duì)高原記憶損傷有改善作用，其機(jī)制可能通過(guò)激活 mTOR及其下游底物（P70S6K和4E-BP1）發(fā)揮作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，mTOR信號(hào)通路可以作為潛在的靶點(diǎn)來(lái)改善高原記憶損傷。
　　2.蘚生馬先