鼠李糖乳桿菌LV108對免疫低下大鼠腸道菌群及代謝的影響研究.pdf

1、乳酸菌是人體腸道中重要的有益菌，可以與腸道粘膜免疫系統(tǒng)相互作用，在抑制腸道致病菌、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、維持腸道微生態(tài)平衡等方面發(fā)揮了重要作用。當(dāng)腸道菌群的平衡受到破壞時，宿主的正常代謝就會受到擾亂，甚至導(dǎo)致疾病。本文對源于廣西巴馬和新疆和田長壽人群糞便中的乳酸菌進(jìn)行體外分離篩選，研究其在體內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)作用，并利用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)和核磁共振技術(shù)探討其對免疫低下大鼠腸道菌群及宿主代謝的影響，從而為益生菌干預(yù)亞健康膳食提供助益。
　

2、　(1)從廣西巴馬和新疆和田長壽人群糞便中分離乳酸菌，并研究其體外疏水能力、對細(xì)胞黏附能力、耐酸耐膽鹽能力及抑菌特性和耐藥性。結(jié)果表明，分離獲得的153株乳酸菌中，10株乳酸菌的表面疏水能力較好、對細(xì)胞黏附能力較強(qiáng);進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，10株乳酸菌中菌株P(guān)W1、LV108、XJH301在pH2.0的人工胃液中培養(yǎng)2h后的存活率分別為34.08％、61.35％、47.15％，在人工腸液中培養(yǎng)4h后的存活率分別為61.42％、86.03％、55

3、.03％，在濃度0.3％的膽鹽MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h后的存活率分別為49.36％、45.24％、37.19％，顯著高于其它菌株;對大腸桿菌的抑菌圈分別為16.76mm、20.49mm、14.35mm，對沙門氏菌的抑菌圈分別為13.23mm、17.19mm、10.63mm，對金黃色葡萄球菌的抑菌圈分別為11.76mm、14.01mm、10.10mm;菌株LV108對利福平、四環(huán)素、頭孢唑啉、氯霉素、頭孢拉定五種抗生素均敏感，對鏈霉素中度

4、敏感，耐藥性低于其他菌株;經(jīng)API及16SrDNA測序?qū)V108菌株鑒定為鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus rhamnosus）。
　　(2)以左旋咪唑作為陽性對照，通過連續(xù)3天腹腔注射40mg/kg環(huán)磷酰胺的方法建立免疫低下大鼠模型。在建模期間，大鼠體重增加緩慢，胸腺生長受到抑制。血清中的IL-2、IgG、IgA含量、溶血素含量顯著降低;大鼠肝、脾巨噬細(xì)胞的廓清指數(shù)K、吞噬指數(shù)α顯著低于對照組，脾淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著下降，

5、建模成功。
　　干預(yù)4周后發(fā)現(xiàn)，L.rhamnosus LV108菌體懸浮液及其發(fā)酵乳能顯著提高大鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù);同時還能顯著增加大鼠血清中IL-2、IgG含量;刺激B淋巴細(xì)胞分化增殖，提高血清中的溶血素含量;顯著提高免疫低下大鼠的肝、脾巨噬細(xì)胞廓清指數(shù)K、吞噬指數(shù)α，提高了大鼠單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)功能;促進(jìn)大鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，進(jìn)而參與機(jī)體脾淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答。
　　(3)利用實(shí)時熒光定量PCR法研究大鼠腸道菌群的變化。結(jié)

6、果表明，與對照組相比，免疫低下大鼠腸道菌群發(fā)生了變化，其中乳酸菌和雙歧桿菌的含量顯著降低，而腸桿菌和腸球菌的含量顯著增加。干預(yù)4周后發(fā)現(xiàn)，L.rhamnosus LV108菌體懸浮液及其發(fā)酵乳能顯著降低大鼠腸道中腸桿菌、腸球菌的含量，而顯著增加大鼠腸道中乳酸菌及雙歧桿菌含量。L.rhamnosus LV108發(fā)酵乳對大鼠腸道菌群的改善幅度要大于L.rhamnosus LV108菌懸液，表明活的LV108菌體既能通過自身發(fā)揮作用，還能通過

7、其代謝產(chǎn)物來改善腸道菌群。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，大鼠腸道內(nèi)乳酸菌的含量同其血清中TNF-α及IgA的水平呈顯著正相關(guān)。
　　(4)利用核磁共振技術(shù)研究大鼠腸道代謝產(chǎn)物的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，免疫低下大鼠糞便代謝產(chǎn)物中異亮氨酸、丙氨酸、丁酸、琥珀酸、磷酸肌酸、氧化三甲胺、牛磺酸、β-葡萄糖、α-葡萄糖、尿嘧啶等成分含量降低。L.rhamnosus LV108菌體懸浮液及發(fā)酵乳對大鼠進(jìn)行4周干預(yù)后，增加了大鼠糞便代謝產(chǎn)物中異亮氨酸、