鼠李糖乳桿菌代謝產(chǎn)物預(yù)防新生大鼠大腸桿菌感染的效果和機(jī)制研究及有效成分分析.pdf

1、目的:
　　敗血癥和腦膜炎是導(dǎo)致新生兒，特別是早產(chǎn)兒死亡的重要原因。大腸桿菌(Escherichia coli，E.coli)是引起新生兒敗血癥和腦膜炎最常見的革蘭陰性致病菌。新生兒E.coli敗血癥和腦膜炎的治療主要依靠抗生素，但療效方面有著諸多的限制，其不合理的使用也導(dǎo)致耐藥E.coli感染發(fā)生率逐年上升。因此，亟需積極的開發(fā)預(yù)防新生兒E.coli敗血癥和腦膜炎的新方法，代替以抗生素為主的治療方法。
　　大腸桿菌是腸道常

2、駐菌，成功突破腸黏膜屏障是自然狀態(tài)下E.coli引起敗血癥和腦膜炎的關(guān)鍵步驟。新生兒的腸道屏障功能發(fā)育不完全，極易感染E.coli繼而引發(fā)敗血癥和腦膜炎，因此，通過外界干預(yù)增強(qiáng)新生兒腸道屏障功能是預(yù)防該病的有效措施。目前的研究表明，鼠李糖乳桿菌GG株（Lactobacillusrhamnosus GG，LGG）的代謝產(chǎn)物具有調(diào)節(jié)腸道屏障功能的效果，但能否用于預(yù)防新生兒E.coli感染仍未有研究。本研究著重探討了LGG培養(yǎng)上清液(LGGC

3、ulture Supernatant，LCS)預(yù)防新生兒E.coli感染的效果及相關(guān)機(jī)理，并對(duì)代謝產(chǎn)物中的有效活性成分作了初步分析。
　　方法:
　　首先，培養(yǎng)人結(jié)腸腺癌細(xì)胞Caco-2建立體外腸屏障模型，初步研究LCS保護(hù)腸屏障功能并預(yù)防E.coli易位的效果;其次，建立新生大鼠腸源性E.coli感染模型，進(jìn)一步研究LCS預(yù)防新生大鼠E.coli系統(tǒng)性感染的效果和相關(guān)機(jī)理;最后，通過高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜等技術(shù)，分析并初步

4、鑒定LCS中發(fā)揮功效的活性成分。
　　結(jié)果:
　　體外研究結(jié)果顯示LCS能抑制E.coli降解Caco-2分泌的黏蛋白，抑制E.coli的黏附和侵襲，減輕E.coli對(duì)腸上皮細(xì)胞間緊密連接的破壞并阻止其易位;體內(nèi)研究結(jié)果顯示LCS能有效預(yù)防新生大鼠腸源性E.coli感染，其機(jī)制是促進(jìn)了新生大鼠腸道細(xì)胞的增殖和分化、增加了腸道表層的黏蛋白、免疫球蛋白A和細(xì)胞間緊密連接蛋白的表達(dá)并降低了腸道的透通性。這些研究結(jié)果表明LCS能促進(jìn)

5、新生大鼠腸道屏障功能的形成和完善，并藉此增強(qiáng)大鼠對(duì)腸源性E.coli感染的抵抗力。最后，通過高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和蛋白表達(dá)與純化技術(shù)，鑒定并體外表達(dá)和純化了LCS中的一種假想蛋白HMPREF0539_2242，后續(xù)的研究發(fā)現(xiàn)該蛋白很可能發(fā)揮了促進(jìn)新生大鼠腸道屏障功能成熟的作用。
　　結(jié)論:
　　新生兒早期腸道屏障功能的不完善主要表現(xiàn)為腸道機(jī)械屏障未形成、正常菌群結(jié)構(gòu)未建立和腸道免疫系統(tǒng)不成熟，這些都為E.coli感染提供了