自擬中藥復方對小鼠大腸桿菌感染的預防作用研究.pdf

1、目的:為探討自擬中藥復方對動物機體的免疫調(diào)節(jié)及預防感染疾病的作用機理，試驗研究了預防用自擬中藥復方對感染大腸桿菌小鼠血液生理指標、免疫器官病理變化及其指數(shù)、血清中Th17及Treg型細胞因子以及TLR4信號通路關(guān)鍵信號分子的影響。
　　方法:(1)選取6只健康小鼠為對照組（記為-72h），另選取252只精神、體況接近的小鼠，按照性別、體重分為6組。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組為中藥復方組，灌胃劑量（相當于生藥含量，按0.1 mL/10g灌胃）分別

2、為:20g/kg、10g/kg、5g/kg;Ⅳ組為藥物對照組，按66mg/kg灌胃黃芪多糖，Ⅴ組為模型組及Ⅵ組為健康對照組灌胃同體積蒸餾水，均1次/d，連用3d。試驗第4d，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組小鼠均腹腔注射1.7×108CFU/mL大腸桿菌液（0.1 mL/只），Ⅵ組小鼠注射等量生理鹽水。(2)在感染0h、3h、6h、12h、24h、48h、1w，每組分別選取6只小鼠處死獲取全血及血清樣本，采集小鼠-72h、0h、12h、1w的胸腺、

3、脾臟備用。(3)用全自動動物血液細胞分析儀檢測小鼠血液生理指標;用ELISA方法測量血清中IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β、TLR4、MyD88、TRIF、NF-κB、P38、JNK、ERK、IRF3、TNF-α、IFN-β的含量。(4)稱取小鼠-72h、0h、1w的胸腺、脾臟及體質(zhì)量，計算臟器指數(shù)，制作-72h、0h、12h、1w的胸腺、脾臟病理切片。
　　結(jié)果:(1)用藥3日后，各中藥復方組小鼠的WBC

4、、LYM及LYM％均顯著高于模型組及對照組(P＜0.05）;感染3h～24h，中藥復方組小鼠的WBC、LYM、MID，在3h～12h的RBC、HGB均顯著高于模型組（P＜0.05）。(2)用藥3日后，中藥復方組小鼠血清IL-17、IL-23，高劑量組的IL-10，中、低劑量組的IL-17/IL-10均顯著高于模型組及對照組（P＜0.05）;在感染3h復方中藥組的IL-10均顯著低于感染組(P＜0.05)，IL-17/IL-10比值均極顯

5、著高于感染組(P＜0.01)，高、中劑量組的IL-17均高于感染組（P＞0.05），IL-23、TGF-β均低于模型組（P＞0.05）。(3)用藥3日后，小鼠血清JNK、NF-κB及TNF-α顯著高于模型組及空白對照組(P＜0.05)，P38及IL-6顯著低于模型組及空白對照組(P＜0.05)，高劑量組TRIF、IFN-β極顯著高于模型組及空白對照組(P＜0.01);與模型組相比，中藥復方組血清TLR4在感染期間均顯著降低(P＜0.05

6、)，MyD88在6h后顯著降低（P＜0.05），NF-κB在6h～12h極顯著降低(P＜0.01)，P38、JNK在感染期間均顯著降低（P＜0.05），高劑量、低劑量組ERK在感染期間均顯著降低（P＜0.05），細胞因子TNF-α、IL-6在3h極顯著降低(P＜0.01)，IFN-β無明顯變化（P＞0.05）。(4)用藥3日后，中藥復方中劑量、低劑量組小鼠的脾質(zhì)量、胸腺質(zhì)量及其指數(shù)均顯著高于模型組及對照組(P＜0.05)，在1w時，中藥

7、復方組體質(zhì)量、脾質(zhì)量、胸腺質(zhì)量及其系數(shù)均顯著高于感染組(P＜0.05)，脾臟病理組織形態(tài)受損程度較小。
　　結(jié)論:(1)通過向小鼠腹腔注射1.7×108CFU/mL大腸桿菌液(0.1 mL/只)，可成功復制小鼠感染模型。(2)預防用自擬中藥復方能明顯改善小鼠血液生理指標并提高感染大腸桿菌小鼠的外周血的RBC、HGB、WBC、LYM及MID，從而提高小鼠對大腸桿菌的抗感染能力。(3)預防用自擬中藥復方通過影響感染小鼠血清IL-17、