去甲萬(wàn)古霉素靜脈及鞘內(nèi)注射腦脊液藥動(dòng)學(xué)研究.pdf

1、目的：建立腦脊液中去甲萬(wàn)古霉素濃度的HPLC測(cè)定方法；考察神經(jīng)外科術(shù)后顱內(nèi)感染患者靜脈及鞘內(nèi)注射去甲萬(wàn)古霉素后，腦脊液中藥物濃度的變化，結(jié)合臨床分析兩種給藥方式的臨床意義。
　　方法：
　　1、色譜條件:色譜柱為Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.025M磷酸二氫鉀緩沖鹽液（pH3.0）（18:82，V/V）；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為236

2、nm；進(jìn)樣量為20μL，內(nèi)標(biāo)：萬(wàn)古霉素。
　　2、腦脊液樣品處理:取腦脊液樣品400μL，加入10％高氯酸溶液200μL，渦旋混勻1min，10000r·min-1離心5min，取上清液20μL進(jìn)行HPLC分析。
　　3、線性范圍：制備50，20，10，5，2，1，0.5，0.2，0.1μg·mL-1的去甲萬(wàn)古霉素腦脊液模擬樣品，按照腦脊液樣品處理后進(jìn)樣分析，所得的去甲萬(wàn)古霉素峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值（Y）與相應(yīng)的去甲萬(wàn)古霉

3、素腦脊液模擬樣品濃度（X）做線性回歸分析，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，考察線性關(guān)系。
　　4、回收率：制備低，中，高三個(gè)濃度（0.2，2，40μg·mL-1）的去甲萬(wàn)古霉素腦脊液模擬樣品，處理后進(jìn)樣分析得去甲萬(wàn)古霉素與內(nèi)標(biāo)的峰面積，分別與等量去甲萬(wàn)古霉素對(duì)照品溶液及等量萬(wàn)古霉素內(nèi)標(biāo)溶液直接進(jìn)樣所得峰面積的比值即為去甲萬(wàn)古霉素及內(nèi)標(biāo)的絕對(duì)回收率；根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算去甲萬(wàn)古霉素測(cè)得濃度與其理論濃度的比值即為相對(duì)回收率。
　　5、精密度:制

4、備低，中，高三個(gè)濃度的去甲萬(wàn)古霉素腦脊液模擬樣品，每個(gè)濃度重復(fù)5份，在一日內(nèi)不同時(shí)間處理后測(cè)定，計(jì)算相應(yīng)濃度的日內(nèi)精密度；三個(gè)不同的工作日內(nèi)重復(fù)上述操作，每日復(fù)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線，依當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算實(shí)測(cè)濃度，計(jì)算相應(yīng)濃度的日間精密度。
　　6、穩(wěn)定性：分別考察低，中，高三個(gè)濃度的去甲萬(wàn)古霉素腦脊液模擬樣品：室溫放置6，12 h；凍融循環(huán)3次；在-40℃低溫保存30，240 d及處理后樣品在室溫放置2，4 h的穩(wěn)定性。考察低，中，高三個(gè)濃度

5、的去甲萬(wàn)古霉素對(duì)照品溶液常溫放置4，12 h；4℃保存2，5 d的穩(wěn)定性。
　　7、床樣品采集:神經(jīng)外科術(shù)后顱內(nèi)感染且保留腰大池置管成年患者，靜脈給予去甲萬(wàn)古霉素后0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，12 h分別留取腦脊液樣品2 mL；鞘內(nèi)給予去甲萬(wàn)古霉素10 mg后2 h，4 h，8 h，12 h，24 h分別留取腦脊液標(biāo)本2 mL，臨床腦脊液樣品離心后取上清溶液于-40℃低溫保存?zhèn)溆谩?br>　　8、據(jù)分析：腦脊液樣品處理

6、后，應(yīng)用HPLC法測(cè)定，根據(jù)當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算去甲萬(wàn)古霉素的濃度，采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1、選定色譜條件下，去甲萬(wàn)古霉素和內(nèi)標(biāo)萬(wàn)古霉素峰形良好，保留時(shí)間分別為5.8 min和7.4 min。腦脊液中內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)去甲萬(wàn)古霉素測(cè)定沒(méi)有干擾。
　　2、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=0.679X+0.021（ R2=0.994），線性范圍0.1~50μg·mL-1。
　　3、收率:低，中，高三種不同濃度去

7、甲萬(wàn)古霉素腦脊液模擬樣品的平均絕對(duì)回收率分別為（77.54±1.68）%，（79.46±2.05）%和（88.08±5.04）%；相對(duì)回收率分別為（96.90±4.84）%，（96.26±5.13）%和（102.36±3.09）%；內(nèi)標(biāo)絕對(duì)回收率（80.11±4.84）%。
　　4、密度：低，中，高三種不同濃度去甲萬(wàn)古霉素模擬樣品日內(nèi)精密度RSD分別為5.00%，5.33%和3.03%日間精密度RSD分別為6.43%，3.86%和

8、8.78%。
　　5、穩(wěn)定性：去甲萬(wàn)古霉素腦脊液模擬樣品室溫放置6，12 h；凍融循環(huán)3次；在-40℃低溫保存30，240 d及處理后樣品在室溫放置2，4 h后性質(zhì)穩(wěn)定。去甲萬(wàn)古霉素對(duì)照品溶液常溫放置4，12 h；4℃保存2，5 d后性質(zhì)穩(wěn)定。
　　6、實(shí)驗(yàn)期間共收集了19例靜脈給予去甲萬(wàn)古霉素患者腦脊液樣品，其中6例效果欠佳時(shí)同時(shí)給予了鞘內(nèi)注射，靜脈給予去甲萬(wàn)古霉素后0，2，4，6，8，12 h腦脊液中去甲萬(wàn)古霉素濃度的均

9、值為2.81±1.91，2.28±1.49，1.31±0.81，1.01±0.67，0.72±0.56，0.50±0.47；聯(lián)合鞘內(nèi)給藥后2，4，8，12，24 h腦脊液中去甲萬(wàn)古霉素濃度的均值為150.72±34.29，75.52±13.02，28.81±8.39，17.11±7.46，4.66±1.71。應(yīng)用去甲萬(wàn)古霉素0.8g，q12h給藥方案，腦脊液中藥物濃度在靜脈滴注結(jié)束時(shí)高于常見致病菌 MIC（P＜0.05），靜脈滴注結(jié)束2

10、 h后可以達(dá)到常見致病菌MIC（P＞0.05），但靜脈滴注結(jié)束4 h后已經(jīng)低于常見致病菌MIC（P＜0.01）。聯(lián)合鞘內(nèi)注射10mg去甲萬(wàn)古霉素后，谷濃度大于常見致病菌的MIC（P＜0.05），但仍小于理想谷濃度10μg·mL-1（P＜0.01），鞘內(nèi)注射12 h后可以達(dá)到10μg·mL-1的理想治療濃度，推測(cè)增加給藥頻次為每12h一次可以使谷濃度達(dá)到理想治療濃度。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)所建立HPLC測(cè)定腦脊液中去甲萬(wàn)古霉素濃度的方法