基于大腦NNSACP網(wǎng)絡(luò)模式正天丸頭痛治療作用的機(jī)制研究.pdf

1、近年來研究表明，疼痛感知的形成是腦內(nèi)廣泛分布且等級性強的多個大腦皮層和皮層下中樞結(jié)構(gòu)間相互聯(lián)系的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)參與編碼、加工和調(diào)節(jié)的?，F(xiàn)代疼痛研究已從單一模式研究轉(zhuǎn)變?yōu)榇竽X的疼痛感知-情緒-認(rèn)知多維模式(The neuralnetwork associated with the sensory, affective and cognitive dimensions of pain,NNSACP)研究。頭痛作為直接的中樞性疼痛，與知覺、情緒和認(rèn)

2、知腦功能屬性緊密相連。眾所周知，突觸傳遞與疼痛研究具有密切關(guān)系。近年來，海馬作為邊緣系統(tǒng)的一個關(guān)鍵組成部分，除了與學(xué)習(xí)記憶及情緒有關(guān)，海馬也被認(rèn)為在疼痛傳導(dǎo)通路中也占有重要地位，參與各種疼痛信息的處理，多數(shù)的錐體細(xì)胞可對各類傷害性刺激做出反應(yīng)。而且疼痛引起了海馬的形態(tài)改變和一些生理機(jī)制變化，影響了海馬的記憶和情緒功能。因此，選擇正天丸對海馬神經(jīng)回路突觸傳遞的影響作為本研究的重點之一，以具有代表性的哺乳動物內(nèi)嗅區(qū)-齒狀回-CA3側(cè)枝-CA

3、1海馬三級神經(jīng)回路為研究靶點。從不同的視角來揭示了正天丸對頭痛治療作用的分子機(jī)制。實驗共分為四個部分:
　　第一部分正天丸對硝酸甘油所致大鼠頭痛模型的行為學(xué)作用研究
　　目的
　　研究正天丸對硝酸甘油誘發(fā)的實驗性頭痛大鼠行為學(xué)的影響。
　　方法
　　SD大鼠共分為5組:空白組，硝酸甘油模型組，正天丸低、高劑量(0.54,1.08g/kg)，陽性藥物西比靈組。連續(xù)灌胃給藥10天，末次給藥半小時后，采用皮下注射

4、硝酸甘油來復(fù)制模型，通過觀察大鼠耳紅出現(xiàn)及消失的時問，前肢撓頭，后肢撓頭，爬籠，甩頭等指標(biāo)來評價正天丸對其一般行為學(xué)的影響。
　　結(jié)果
　　1.基本行為表現(xiàn):注射硝酸甘油后動物立即出現(xiàn)活動增加，前肢頻繁撓頭，煩躁不安，于造模后30 min達(dá)到頂峰，60 min以后動物活動逐漸減少，出現(xiàn)倦臥狀態(tài)。
　　2.耳紅:正常組始終沒有出現(xiàn)耳紅現(xiàn)象，而模型組在注射硝酸甘油最早2.1 min出現(xiàn)耳紅現(xiàn)象，平均在4 min出現(xiàn)耳紅;耳

5、紅消失時間最早在63 min，平均消失時間為76.2 min。
　　3.撓頭次數(shù):模型組大鼠的前肢、后肢撓頭次數(shù)均顯著性的增加(P＜0.001，P＜0.001);正天丸高劑量組也可顯著降低前肢、后肢撓頭次數(shù)(P＜0.001，P＜0.01);正天丸低劑量組可顯著降低前肢撓頭次數(shù)(P＜0.05)，但對后肢撓頭次數(shù)沒有顯著影響(P＞0.05);西比靈作為陽性對照，表現(xiàn)出了與正天丸低劑量相似的作用。
　　4.爬籠次數(shù):正天丸高劑量可

6、減少大鼠爬籠次數(shù)，但無顯著性差異(P＞0.05)，正天丸低及西比靈組沒有減少大鼠的爬籠次數(shù)，與模型組相較無顯著性差異(P＞0.05,P＞0.05)。
　　5.甩頭次數(shù):正天丸低、高劑量及西比靈組均可以顯著性減少大鼠的甩頭次數(shù)(P＜0.05, P＜0.01,P＜0.001)。
　　結(jié)論
　　硝酸甘油成功構(gòu)建了大鼠頭痛模型，且正天丸可顯著緩解硝酸甘油誘發(fā)的頭痛基本癥狀。
　　第二部分正天丸對海馬內(nèi)嗅區(qū)前穿質(zhì)-齒狀回通

7、路突觸傳遞的作用研究
　　目的
　　研究止天丸對大鼠海馬內(nèi)嗅區(qū)前穿質(zhì)-齒狀回突觸傳遞的影響。
　　方法
　　采用在體場電位記錄方法，大鼠烏來糖麻醉后，將其頭部于耳桿0.5-0.6 cm處固定在腦立體定位儀上，參照大鼠腦立體定位圖譜定位PP及DG區(qū)位置，川顱鉆按照圖譜位置在大鼠腦上打孔，用來放置記錄電極R和刺激電極S。以Dur:100μs，Interl:30 s的刺激方波記錄基礎(chǔ)刺激誘發(fā)出穩(wěn)定的PS波形。穩(wěn)定記錄3

8、0min后，給予高頻刺激誘導(dǎo)突觸長時程增強(LTP)形成，并研究正天丸低、高劑量(0.54，1.08 g/kg)及陽性藥物西比靈對海馬前穿質(zhì)-齒狀回通路突觸傳遞的影響。
　　結(jié)果
　　與空白組相比較，模型組高頻刺激后各個時間段PS增幅值均降低(P＜0.05);與模型組比較，正天丸高、低劑量組及西比靈組的高頻刺激后各個時間段PS增幅值均明顯增加(P＜0.001，P＜0.01，P＜0.05)。
　　結(jié)論
　　整體大鼠

9、電生理實驗中，硝酸甘油誘發(fā)的頭痛可明顯降低海馬前穿質(zhì)-齒狀回通路PS增幅值;正天丸低、高劑量和西比靈可顯著性增加前穿質(zhì)-齒狀回通路PS增幅值;結(jié)果顯示正天丸對海馬前穿質(zhì)-齒狀回通路突觸傳遞有顯著的增強作用。
　　第三部分正天丸對海馬腦片Shaffer側(cè)枝-CA1通路突觸傳遞的作用研究
　　目的
　　采用離體胞外記錄海馬區(qū)場電位的方法，利用急性腦片，觀察正天丸對大鼠海馬Shaffer側(cè)枝-CA1通路突觸傳遞的作用。

10、>　　方法
　　用振動切片機(jī)將海馬切成厚度為350μm的腦片，通過離體胞外記錄海馬區(qū)場電位的方法，調(diào)節(jié)微操縱器將刺激電極置于由海馬CA3區(qū)錐體細(xì)胞發(fā)出而投射于CA1區(qū)的Schaffer側(cè)支纖維上，記錄電極置于CA1區(qū)的錐體細(xì)胞胞體層下方。腦片置于持續(xù)灌流的通以混合氧的人工腦脊液(artificial cerebrospinal fluid，ACSF)液中，通過AxoScope系統(tǒng)記錄正天丸低、高劑量(0.54，1.08 g/kg)

11、及陽性藥物兩比靈對大鼠海馬Shaffer側(cè)枝-CA1通路突觸傳遞的作用。
　　結(jié)果
　　與空白組相較，模型組高頻刺激后各個時間段fEPSP斜率增幅值均降低(P＜0.05);與模型組比較，正天丸高、低劑量組及西比靈組高頻刺激后各個時間段fEPSP斜率增幅值均明顯增加(P＜0.001，P＜0.01，P＜0.01)。
　　結(jié)論
　　急性海馬腦片電生理實驗中，硝酸甘油誘發(fā)的頭痛可明顯降低腦片Shaffer側(cè)枝-CA1區(qū)f

12、EPSP斜率增幅值;正天丸低、高劑量和西比靈組可顯著性增加腦片Shaffer側(cè)枝-CA1通路fEPSP斜率增幅值。結(jié)果顯示正天丸能顯著增強海馬腦片Shaffer側(cè)枝-CA1通路突觸傳遞。
　　第四部分正天丸頭痛治療中TRPV1的作用機(jī)制研究
　　目的
　　研究正天丸對大鼠海馬、皮層中TRPV1蛋白表達(dá)的影響，以探索正天丸對頭痛臨床治療作用的分子機(jī)制。
　　方法
　　將大鼠分為3組，空白組、硝酸甘油模型組和正

13、天丸給藥組。連續(xù)灌胃給藥10天，末次給藥結(jié)束后斷頭取腦，分離海馬及皮層。通過Western Blotting技術(shù)，研究正天丸對海馬結(jié)構(gòu)和皮層中TRPV1蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果
　　與空白組相比，模型組大鼠海馬和皮層中TRPV1蛋白表達(dá)水平均明顯升高(P＜0.01，P＜0.01);與模型組相比，正天丸高劑量組大鼠海馬組織和皮層中TRPV1蛋白表達(dá)量都顯著性降低(P＜0.01，P＜0.05)。
　　結(jié)論
　　正天