NeureguliN-1-ErbB信號通路在通心絡(luò)對急性心肌梗死保護作用中的影響及機制研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行論述：
　　第一部分 通心絡(luò)通過neuregulin-1/ErbB信號通路促進人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞功能
　　目的:心臟微血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能的完整對心肌有效的血流灌注和正常功能的維持發(fā)揮著重要作用。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-1(neuregulin-1，NRG-1)是表皮生長因子家族的一員，其特異性表達(dá)于心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞和心內(nèi)膜。NRG-1通過與心肌細(xì)胞表面ErbB受體結(jié)合，激活下游通路，對心臟發(fā)育、代謝等過程發(fā)

2、揮著重要的調(diào)節(jié)作用。然而，近些年來，其表達(dá)的組織學(xué)特異性產(chǎn)生了爭議，其對心臟微血管內(nèi)皮的自分泌作用也尚未闡明。通心絡(luò)(tongxinluo，TXL)是一種具有內(nèi)皮保護功能的復(fù)方中藥，廣泛應(yīng)用于心腦血管疾病的治療。本研究旨在探索NRG-1自分泌對心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響以及TXL的調(diào)節(jié)作用。
　　方法:在大鼠和人的心臟標(biāo)本中，采用NRG-1與vWF（內(nèi)皮標(biāo)記）免疫熒光共染色，驗證NRG-1表達(dá)的組織學(xué)特異性。以慢病毒為載體，將N

3、RG-1基因shRNA轉(zhuǎn)染人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞(human cardiac microvascular endothelial cells，HCMECs)，抑制NRG-1基因的表達(dá)。CCK-8法檢測HCMECs體外增殖活力，劃痕試驗檢測細(xì)胞體外遷移能力，以缺氧4h/復(fù)氧2h為損傷模型，細(xì)胞存活實驗檢測細(xì)胞抗損傷能力，TUNEL染色法檢測細(xì)胞凋亡水平。給予通心絡(luò)溶液(800μg/ml)干預(yù)，檢測其對HCMECs增殖、遷移和抗損傷能力的影響

4、，以及NRG-1基因的表達(dá)被抑制后該影響的變化。
　　結(jié)果:NRG-1特異性的表達(dá)于心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞和心內(nèi)膜，大的冠脈內(nèi)皮、靜脈內(nèi)皮均不表達(dá)。NRG-1自分泌顯著促進HCMECs體外增殖、遷移和抗損傷能力(p＜0.05），外源性補充重組人neuregulin-1(rhNRG-1)能進一步加強該作用(p＜0.05)。通心絡(luò)能顯著促進HCMECs體外增殖、遷移和抗損傷能力(p＜0.05)，當(dāng)neuregulin-1基因的表達(dá)被抑制后

5、，該作用被部分消除。
　　結(jié)論:上述結(jié)果表明，neuregulin-1特異性地表達(dá)于心臟微血管內(nèi)皮和心內(nèi)膜，通心絡(luò)部分通過neuregulin-1/ErbB信號通路促進心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞功能。
　　第二部分 通心絡(luò)通過neuregulin-1/ErbB信號通路減輕大鼠急性心肌梗死再灌后心肌無再流和再灌注損傷
　　目的:心肌無再流和再灌注損傷是急性心肌梗死(acute myocardialinfarction，AMI)再

6、灌注治療時代的兩大難題。既往研究表明，具有微血管內(nèi)皮保護功能的復(fù)方中藥通心絡(luò)(tongxinluo，TXL)能有效減輕AMI再灌后心肌無再流和再灌注損傷，而具體機制尚未闡明。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-1(neuregulin-1)特異性表達(dá)于心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞及心內(nèi)膜，與心肌細(xì)胞表面ErbB受體結(jié)合后，激活下游信號通路，對心肌缺血再灌注損傷具有明確的保護作用。因此，本研究旨在探索通心絡(luò)對大鼠AMI再灌后心肌無再流和再灌注損傷的保護作用是否與neur

7、egulin-1/ErbB信號通路有關(guān)，并對心肌無再流發(fā)生的病理機制作進一步探索。
　　方法:開胸結(jié)扎大鼠心臟左前降支(LAD)1小時，松開24小時或4周，分別建立AMI再灌注急性期模型和慢性期模型。結(jié)扎LAD前2h經(jīng)頸靜脈注射neuregulin-1中和抗體抑制neuregulin-1/ErbB信號通路;結(jié)扎LAD前15 min給予通心絡(luò)灌胃。病理染色測定心肌缺血危險區(qū)面積(area at risk，AAR)、心肌無再流面積(a

8、rea of no-reflow, ANR)、心肌壞死面積(area of necrosis，AN);心臟超聲和血流動力學(xué)檢查評價心功能;病理染色和透射電鏡觀察心肌組織病理變化;ELISA和Real-time PCR分別檢測neuregulin-1、VE-cadherin等在心臟各區(qū)域的表達(dá)。
　　結(jié)果:通心絡(luò)顯著促進neuregulin-1的分泌(p＜0.05)，減輕大鼠AMI再灌后心肌無再流和再灌注損傷，縮小梗死面積，改善急性