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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.通過(guò)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠模型證實(shí)京尼平的降脂減肥作用。
2.初步探索京尼平降脂減肥的中樞機(jī)制。
方法:
選取清潔級(jí)雄性Wistar大鼠98只(200±20g),在適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn),隨機(jī)分為正常對(duì)照組15只和高脂飲食組83只,分別給予基礎(chǔ)飼料和高脂飼料喂養(yǎng),每周測(cè)量體重一次,喂養(yǎng)12周后,選取高脂飲食組體重超過(guò)正常對(duì)照組平均體重20%者作為成模大鼠,共39只。將此成模大鼠再隨機(jī)
2、分為3組,分別為食源性肥胖組(diet induced obesity,DIO)13只,京尼平低劑量組13只,京尼平高劑量組13只,繼續(xù)給予高脂飼料喂養(yǎng)。京尼平低劑量組每日腹腔注射京尼平7mg/kg,京尼平高劑量組每日腹腔注射京尼平14mg/kg,連續(xù)注射10天,每日測(cè)量大鼠體重及攝食量。10天之后,每組選取3只進(jìn)行灌流取腦,制作冰凍切片,免疫熒光染色觀察大鼠下丘腦神經(jīng)肽Y(neusopeptide Y, NPY)的表達(dá)情況。其余大鼠處
3、死,取血,檢測(cè)血清中甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的含量,ELISA法檢測(cè)血清中瘦素含量。剝離睪丸周?chē)?腎周?chē)途W(wǎng)膜周?chē)窘M織,計(jì)算各組大鼠的脂肪指數(shù)。取下丘腦組織測(cè)定其ATP水平,線(xiàn)粒體膜電位(motichondrial membrane potential,MMP)和線(xiàn)粒體活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,采用RT-qPCR
4、法檢測(cè)下丘腦中腫瘤壞死因子-α(tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、NPY及阿片促黑色素原(proopiomelanocortin,POMC)的mRNA表達(dá)。
結(jié)果:
1.食源性肥胖大鼠模型的建立
經(jīng)過(guò)12周的高脂飲食喂養(yǎng),成模大鼠共計(jì)39只,其平均體重大于正常對(duì)照組大鼠平均體重的20%,達(dá)到肥胖成模標(biāo)準(zhǔn)。
2.京尼
5、平對(duì)大鼠肥胖相關(guān)指標(biāo)的影響
(1)京尼平減輕肥胖大鼠體重
與DIO組大鼠相比,腹腔注射京尼平10天后,京尼平低劑量和高劑量組大鼠體重均顯著減輕,其中京尼平低劑量組較給藥前減少37.18±7.02g(P<0.01),高劑量組較給藥前減少62.87±13.46g(P<0.01),說(shuō)明京尼平能夠有效減輕食源性肥胖大鼠的體重。
(2)京尼平減少肥胖大鼠攝食量
經(jīng)過(guò)10天的京尼平腹腔注射,京尼平低劑量與高劑
6、量組大鼠的攝食量均低于DIO組大鼠的攝食量(P<0.05),京尼平有效地減少了食源性肥胖大鼠的攝食量。
(3)京尼平降低肥胖大鼠脂肪指數(shù)
給予腹腔注射京尼平后,與DIO組大鼠相比,京尼平高劑量組大鼠的脂肪指數(shù)降低了1.78%(P<0.01),食源性肥胖大鼠的體脂含量顯著減少。
3.京尼平改善肥胖大鼠血脂水平
DIO組大鼠血清中TG的含量高于正常對(duì)照組,HDL-C的含量顯著地低于正常對(duì)照組,說(shuō)明DI
7、O組大鼠出現(xiàn)了一定程度的血脂紊亂。給予腹腔注射京尼平后,與DIO組大鼠相比,京尼平低劑量組大鼠血清中TG和LDL-C的含量有下降的趨勢(shì),但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,HDL-C的含量有所增多(P<0.05)。京尼平高劑量組大鼠血清中TG含量顯著降低(P<0.01),LDL-C的含量降低(P<0.05),而HDL-C的含量顯著升高(P<0.01)。
4.京尼平降低肥胖大鼠下丘腦ATP水平
與DIO組大鼠相比,京尼平低劑量組大
8、鼠下丘腦內(nèi)ATP水平有下降的趨勢(shì),但結(jié)果不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。京尼平高劑量組大鼠下丘腦內(nèi)ATP水平降低26.72%,減少了食源性肥胖大鼠下丘腦內(nèi)的ATP水平。
5.京尼平對(duì)大鼠下丘腦線(xiàn)粒體膜電位和ROS的影響
各組大鼠間下丘腦線(xiàn)粒體膜電位水平并無(wú)顯著性差異,而DIO組大鼠下丘腦線(xiàn)粒體ROS水平較正常對(duì)照組升高(P<0.05)。給予京尼平干預(yù)后,京尼平各組大鼠下丘腦內(nèi)線(xiàn)粒體ROS水平均較DIO組顯著降低(P<0.01),其
9、中京尼平低劑量組降低了51.81%,京尼平高劑量組降低了57.27%。
6.京尼平抑制大鼠下丘腦內(nèi)TNF-α mRNA和IL-6 mRNA的表達(dá)
以正常對(duì)照組大鼠為標(biāo)準(zhǔn),DIO組大鼠下丘腦內(nèi)TNF-α mRNA和IL-6 mRNA含量顯著升高(P<0.01),提示DIO組大鼠腦內(nèi)出現(xiàn)了一定程度的炎癥反應(yīng),經(jīng)京尼平干預(yù)后,京尼平低劑量組大鼠下丘腦內(nèi)TNF-α mRNA水平降低(P<0.05),IL-6mRNA水平有減少
10、的趨勢(shì),但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;京尼平高劑量組大鼠下丘腦內(nèi)TNF-α mRNA和IL-6 mRNA水平顯著降低(P<0.01)。
7.京尼平降低肥胖大鼠血清瘦素水平
與正常對(duì)照組大鼠相比,DIO組大鼠血清瘦素水平升高(P<0.05),表現(xiàn)為高瘦素血癥,而經(jīng)京尼平干預(yù)后的DIO大鼠血清瘦素水平均顯著降低(P<0.01)。
8.京尼平對(duì)大鼠下丘腦攝食相關(guān)神經(jīng)肽水平的影響
(1)京尼平抑制肥胖大鼠下丘腦
11、NPYmRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)
以正常對(duì)照組大鼠為標(biāo)準(zhǔn),DIO組大鼠下丘腦內(nèi)NPY mRNA表達(dá)顯著增多(P<0.01),京尼平低劑量及高劑量組大鼠下丘腦內(nèi)NPY mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.01),各組蛋白表達(dá)情況與此相同。
(2)京尼平促進(jìn)肥胖大鼠下丘腦POMC mRNA轉(zhuǎn)錄
以正常對(duì)照組大鼠為標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)京尼平干預(yù)后,京尼平低劑量與高劑量組大鼠下丘腦內(nèi)POMC mRNA的表達(dá)均顯著上調(diào)(P<0.01)。<
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