四氫原小檗堿先導(dǎo)化合物左旋紫堇達(dá)明和左旋小檗紅堿的臨床前藥代動力學(xué)研究.pdf

1、近年來，四氫原小檗堿類（THPBs）化合物由于其廣泛的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛效用和優(yōu)良的成藥潛力而越來越受到關(guān)注，但是對這一類化合物的藥理藥代動力學(xué)研究還不夠詳盡，成藥的也是很少，只用羅通定得到了較為全面的研究并成為臨床用藥，所以，對四氫原小檗堿類化合物的藥代動力學(xué)及其表現(xiàn)出的吸收、分布、代謝、排泄規(guī)律及代謝途徑的研究對該類藥物的開發(fā)至關(guān)重要。
　　本課題選擇了其中兩種未被詳細(xì)研究的先導(dǎo)化合物左旋紫堇達(dá)明（l-Tetrahydrocoryda

2、lmine，l-CDL）和左旋四氫小檗紅堿（l-Tetrahydroberberrubine，l-THR）作為研究對象。對左旋紫堇達(dá)明（l-Tetrahydrocorydalmine，l-CDL）的鎮(zhèn)靜、催眠作用做了初步研究，并且采用LC-MS/MS定量分析方法，系統(tǒng)研究了左旋紫堇達(dá)明（l-Tetrahydrocorydalmine，l-CDL）在SD大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征，對左旋紫堇達(dá)明（l-Tetrahydrocorydalmin

3、e，l-CDL）其代謝產(chǎn)物左旋千金藤啶堿(l-Stepharanine，l-SPD)在SD大鼠體內(nèi)的排泄以及組織分布也進(jìn)行了全面的研究。同時，采用LC-MS/MS定量分析方法對另一種先導(dǎo)化合物左旋四氫小檗紅堿（l-Tetrahydroberberrubine，l-THR）在體內(nèi)的藥代動力學(xué)進(jìn)行了研究。獲得了這兩類四氫原小檗堿（THPBs）先導(dǎo)化合物的藥代動力學(xué)特征及其代謝性質(zhì)。通過本課題的研究，對這些先導(dǎo)化合物的后續(xù)研究及開發(fā)提供了重要

4、的科學(xué)依據(jù)。
　　1.左旋紫堇達(dá)明鎮(zhèn)靜、催眠藥效學(xué)研究
　　目的：評價l-CDL的鎮(zhèn)靜、催眠作用。
　　方法：l-CDL對小鼠自發(fā)活動的影響：40只昆明小鼠，隨機(jī)分組，分別腹腔注射1、5、10mg·kg-1三個不同劑量的l-CDL，給藥后立即將小鼠放入YLS-1A小鼠多功能自主活動記錄儀；記錄小鼠在給藥后90min內(nèi)的活動次數(shù)，考察其在不同劑量條件下對小鼠自發(fā)活動的影響。
　　l-CDL對戊巴比妥鈉鎮(zhèn)靜催眠作用的

5、影響：小鼠腹腔注射溶劑對照和1、5、10mg·kg-1的l-CDL藥液，30min后再給各組小鼠注射40mg·kg-1的戊巴比妥鈉溶液，記錄各組小鼠的入睡時間和醒來時間。
　　l-CDL與閾下催眠劑量戊巴比妥鈉的協(xié)同作用實驗：將40只小鼠隨機(jī)分為4組，分別給小鼠腹腔注射Veh和1、5、10mg·kg-1的l-CDL藥液，30min后再給各組小鼠注射30mg·kg-1的戊巴比妥鈉（Bar）溶液，記錄各組小鼠的睡眠個數(shù)。
　　結(jié)

6、果：l-CDL對小鼠自發(fā)活動的影響：給予l-CDL1mg·kg-1使小鼠的活動性略有增加，給予10mg·kg-1時小鼠的活動次數(shù)明顯降低，給藥90min后對小鼠活性仍然具有抑制作用。
　　l-CDL對戊巴比妥鈉鎮(zhèn)靜催眠作用的影響：l-CDL能夠延長閾劑量戊巴比妥鈉（Bar）的睡眠時間，并且能夠明顯縮短閾劑量戊巴比妥鈉（Bar）小鼠的睡眠潛伏期，5mg·kg-1時效果最為顯著（p＜0.001）。
　　l-CDL與閾下催眠劑量戊

7、巴比妥鈉的協(xié)同作用實驗：l-CDL1、5和10mg·kg-1三個劑量均能夠增加閾下劑量戊巴比妥鈉（30mg·kg-1）誘發(fā)的小鼠鎮(zhèn)靜催眠的個數(shù)。
　　結(jié)論：l-CDL具1、5和10mg·kg-1三個劑量有鎮(zhèn)靜催眠作用，在10mg·kg-1劑量下會明顯抑制小鼠自發(fā)活動。
　　2．左旋紫堇達(dá)明在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究
　　目的：建立l-CDL在SD大鼠血漿中的LC-MS/MS檢測方法，研究其在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征，并

8、進(jìn)行生物利用度研究。
　　方法：SD大鼠10只，隨機(jī)分成兩組，每組5只，一組尾靜脈注射給藥l-CDL3mgkg-1，于給藥前和給藥后2、5、15、30min和1、2、4、8、12、24h采血，血漿樣品處理后使用LC-MS/MS測其濃度；另一組經(jīng)口服灌胃給藥10mgkg-1，于給藥前和給藥后5、15、30min和1、2、4、8、12、24h采血，血漿樣品處理后使用LC-MS/MS測其濃度。
　　結(jié)果：建立的l-CDL血漿LC-

9、MS/MS方法簡單、快速、靈敏度高、精確度好、基質(zhì)干擾小。l-CDL靜注后的消除半衰期為（4.14±1.66）h，AUC值為（1390.34±253.93）ng·mL-1·h?？诜湛?，消除緩慢，消除半衰期為（7.04±3.93）h，AUC為（2408.01±630.49）ng·mL-1·h。生物利用度達(dá)到了55.8％。
　　結(jié)論：l-CDL吸收快速，消除緩慢，口服生物利用度高。
　　3.左旋紫堇達(dá)明及其代謝產(chǎn)物在大鼠尿液

10、、糞便和膽汁中的排泄動力學(xué)研究
　　目的：建立 l-CDL及其代謝產(chǎn)物 l-SPD在 SD大鼠尿液、糞便和膽汁中的LC-MS/MS分析方法，研究l-CDL及其代謝產(chǎn)物l-SPD的排泄規(guī)律以及主要排泄途徑。
　　方法：l-CDL和l-SPD在大鼠尿液和糞便中的排泄動力學(xué)：SD大鼠6只，單劑量口服l-CDL10mg·kg-1，分別于設(shè)定時間點收集尿液和糞便，記錄尿液體積和風(fēng)干后糞便重量。采用LC-MS/MS法測定所收集大鼠尿液和

11、糞便中l(wèi)-CDL及其代謝產(chǎn)物l-SPD的濃度，分別計算它們在大鼠尿液和糞便中的累積排泄量和回收率。
　　l-CDL和l-SPD在大鼠膽汁中的排泄動力學(xué)：SD大鼠4只，實行膽管引流手術(shù)后單劑量口服 l-CDL10mg·kg-1，分別于設(shè)定時間點收集膽汁。采用LC-MS/MS法測定l-CDL和l-SPD在大鼠膽汁中的濃度，計算他們在膽汁中的累積排泄量和回收率。
　　結(jié)果：所建立的l-CDL和l-SPD在大鼠尿、糞便和膽汁中LC-

12、MS/MS方法專屬性好、基質(zhì)干擾小、靈敏度高。l-CDL在大鼠尿中的回收率僅為0.52%，l-SPD在大鼠尿中的回收率為7.5%；l-CDL在大鼠糞便中的回收率為10.5%，l-SPD在大鼠糞便中的回收率為4.66%；l-CDL在大鼠膽汁中的回收率為12.8%，l-SPD在大鼠膽汁中的回收率為30.2%。
　　結(jié)論：l-CDL在大鼠尿液中的回收率較少，在大鼠糞便和膽汁中的回收率較高；l-SPD在大鼠膽汁中的回收率較高，在大鼠尿液和

13、糞便中回收率相對較低。說明l-CDL在大鼠體內(nèi)存在廣泛的代謝過程，在尿液中回收率少，可能存在首過效應(yīng)。
　　4.左旋紫堇達(dá)明及其代謝產(chǎn)物在大鼠體內(nèi)的組織分布研究
　　目的：建立l-CDL及其代謝產(chǎn)物l-SPD在大鼠各組織中的LC-MS/MS方法，探究l-CDL和l-SPD在大鼠體內(nèi)的分布規(guī)律。
　　方法：SD大鼠30只，隨機(jī)分成5組，每組6只，其中一組給予生理鹽水作為空白對照，其余4組單劑量口服給藥10，分別于15mi

14、n、30min、4h、12h處死，快速取出個組織，稱重后制成組織勻漿液，處理后使用LC-MS/MS方法測定l-CDL和l-SPD在各個組織中的濃度。
　　結(jié)果：l-CDL在心、肝、脾、肺、腎、腦、腸、肌肉等組織中均有分布，其中在肝、肺、脾中各個時間點的濃度都要高于其他組織；l-SPD在心、肝、脾、肺、腎、腸、肌肉中都有分布，但是在腦中4個時間點都沒有檢測到其存在，其中在腸、腎中各個時間點的濃度都要高于其他組織。
　　結(jié)論：l

15、-CDL和 l-SPD在大鼠體內(nèi)快速分布，廣泛分布于各組織中，l-SPD不能通過血腦屏障。
　　5．左旋小檗紅堿在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究
　　目的：建立l-THR在SD大鼠血漿中的LC-MS/MS檢測方法，研究其在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征，并進(jìn)行生物利用度研究。
　　方法：SD大鼠10只，隨機(jī)分成兩組，每組5只，一組尾靜脈注射給藥l-THR3mg·kg-1，于給藥前和給藥后2、5、15、30min和1、2、4、8、1

16、2、24h采血，血漿樣品處理后使用LC-MS/MS測其濃度；另一組經(jīng)口服灌胃給藥10mg·kg-1，于給藥前和給藥后5、15、30min和1、2、4、8、12、24h采血，全血樣品處理后使用LC-MS/MS測其濃度。
　　結(jié)果：建立的l-THR全血LC-MS/MS方法簡單、快速、靈敏度高、精確度好、基質(zhì)干擾小。l-THR靜注后的消除半衰期為（0.23±0.07）h，AUC值為（397.03±97.39）ng·mL-1·h?？诜?/p>