桔梗、黨參內(nèi)生菌的人參皂苷生物轉(zhuǎn)化活性研究.pdf

1、人參為我國傳統(tǒng)中藥材，其主要活性成分為人參皂苷，由于稀有人參皂苷分子量小，生物利用度高，細(xì)胞膜滲透性強(qiáng)，具有顯著的藥理活性，但因其在天然植物中不存在或含量很低，限制了應(yīng)用。近年來，內(nèi)生菌在生物轉(zhuǎn)化上的應(yīng)用已引起人們的廣泛關(guān)注，因內(nèi)生菌與宿主植物長(zhǎng)期共同進(jìn)化，可形成各種胞外酶，促進(jìn)代謝產(chǎn)物的積累和生物合成。本研究的目的是從含三萜類成分的桔梗、黨參內(nèi)獲取具有人參皂苷生物轉(zhuǎn)化活性的內(nèi)生菌。
　　本研究從黨參和桔梗中共分離101種內(nèi)生菌，

2、篩選出47種產(chǎn)β-葡萄糖苷酶內(nèi)生菌。通過單體皂苷轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，挑選出轉(zhuǎn)化活性顯著的三株高效菌株，命名為內(nèi)生菌JG09、JG10和D19。結(jié)合形態(tài)觀察和分子學(xué)鑒定，對(duì)高效菌株鑒定，根據(jù)測(cè)序結(jié)果構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明：內(nèi)生菌 JG09屬于 Lucteibacter屬；內(nèi)生菌JG10屬于Luteibacter rhizovicinus屬；內(nèi)生菌D19藤黃色桿菌屬（Dyella）。在人參根總皂苷轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中，以人參根總皂苷為底物，優(yōu)化發(fā)酵條件。內(nèi)生

3、菌JG09的最佳條件：LL培養(yǎng)基，pH為4.0，稀有人參皂苷C-K、Rh1和F2的最大產(chǎn)率分別為16％、10%和35%；內(nèi)生菌JG10的最佳條件：水為培養(yǎng)基，pH為4.0，稀有人參皂苷C-K、Rh1和F2的最大產(chǎn)率分別為10%、6%和22%；內(nèi)生菌D19的最佳條件：水為培養(yǎng)基，pH為5.0，稀有人參皂苷C-K、Rh1和F2的最大產(chǎn)率分別為17%、8%和30%。在人參主皂苷轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中，結(jié)合TLC和HPLC分析法探究?jī)?nèi)生菌JG09對(duì)單體皂苷

4、的轉(zhuǎn)化路徑，分析稀有人參皂苷來源。結(jié)果表明：稀有人參皂苷C-K是由內(nèi)生菌對(duì)人參二醇類皂苷Rb1、Rb2、Rc和Rd的作用產(chǎn)生，稀有人參皂苷Rh1是由內(nèi)生菌人參三醇類皂苷Rg1的作用產(chǎn)生。內(nèi)生菌JG09對(duì)單體皂苷的轉(zhuǎn)化路徑為：Rb1→Rd→F2→C-K；Rb2→C-O→C-Y→C-K；Rc→C-Mc1→C-Mc→C-K；Rd→F2→C-K；Rg1→Rh1。在人參皂苷Rb1轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中，比較內(nèi)生菌JG09、JG10和D19的轉(zhuǎn)化活性。結(jié)果如下