Treg-Th17細胞失衡在老年慢性阻塞性肺疾病中的作用研究.pdf

1、目的：研究Treg、Th17及其相關(guān)因子在老年慢性阻塞性肺疾病中的表達及變化，初步探討Treg/Th17細胞失衡在老年COPD中的作用。
　　方法：分為動物實驗和臨床實驗兩部分。(1)動物實驗：通過觀察大鼠皮毛顏色，測體重，臟器系數(shù)比，觀察各個臟器的組織切片，檢測肺、肝、心、腎、腦功能及衰老因子Sirtuin-1的表達，確定老年大鼠年齡。隨機將雄性SD大鼠分為成年組（6月）和老年組（24月），隨機分為對照組、COPD模型組、維甲酸

2、干預(yù)組、環(huán)孢素A干預(yù)組，采用每日熏香煙和氣管內(nèi)滴入脂多糖（LPS）法制作大鼠COPD模型,同時利用維甲酸、環(huán)孢素A對其進行干預(yù)。測定大鼠肺功能并觀察大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)改變；流式檢測Treg細胞、Th17細胞數(shù)目；免疫印跡（western blot）檢測肺組織中Foxp3、ROR的蛋白表達水平；免疫組化分析肺組織中IL-10的表達水平；ELISA檢測血清、肺泡灌洗液IL-10、IL-17的表達(2)臨床實驗：收集手術(shù)切除肺癌患者肺組織標

3、本，COPD患者及健康人的外周血，分為成年對照組、老年對照組、成年COPD組、老年COPD組。免疫印跡（western blot）檢測肺組織中Foxp3、ROR的蛋白表達水平；免疫組化分析肺組織中IL-10的表達水平；ELISA檢測血清IL-10、IL-17的表達。
　　結(jié)果：
　　1.動物實驗結(jié)果：
　?。?）通過觀察大鼠皮毛顏色，測體重，臟器系數(shù)比，各個臟器的組織切片，檢測肺、肝、心、腎、腦功能及衰老因子Sirtu

4、in-1的表達，確定老年大鼠年齡為24月。
　?。?）大鼠肺功能指標（FEV0.3、FEV0.3/FVC％、PEF）在COPD組較對照組降低（P＜0.05），甲酸干預(yù)組較COPD組升高（P＜0.05），環(huán)孢素A干預(yù)組較COPD組下降（P＜0.05，老年組較成年組下降（P＜0.05）。COPD組大鼠肺部病理改變符合COPD的形態(tài)學(xué)特征，維甲酸干預(yù)組大鼠肺組織病理改變較COPD模型組改善，環(huán)孢素A干預(yù)組大鼠肺組織病理改變破壞明顯，老年

5、組較成年組肺組織病理改變破壞更加明顯。
　?。?）Treg細胞數(shù)目在COPD組較對照組降低（P＜0.05），維甲酸干預(yù)組較COPD組升高（P＜0.05），環(huán)孢素A干預(yù)組較COPD組下降（P＜0.05），老年組較成年組均降低（P＜0.05）。Th17細胞數(shù)目在COPD組較對照組升高（P＜0.05），維甲酸干預(yù)組較COPD組下降（P＜0.05），環(huán)孢素A干預(yù)組較COPD組升高（P＜0.05），老年組較成年組表達均升高（P＜0.05）。

6、
　?。?）大鼠肺組織中Foxp3蛋白表達在COPD組較對照組降低（P＜0.05），維甲酸干預(yù)組較COPD組升高（P＜0.05），環(huán)孢素A干預(yù)組較COPD組下降（P＜0.05），老年組較成年組均降低（P＜0.05）。ROR蛋白表達在COPD組較對照組升高（P＜0.05），維甲酸干預(yù)組較COPD組下降（P＜0.05），環(huán)孢素A干預(yù)組較COPD組升高（P＜0.05），老年組較成年組均升高（P＜0.05）。
　?。?）大鼠血清IL

7、-10的表達在COPD組較對照組降低（P＜0.05），維甲酸干預(yù)組較COPD組升高（P＜0.05），環(huán)孢素A干預(yù)組較COPD組下降（P＜0.05），老年組較成年組均降低（P＜0.05）。IL-17的表達在COPD組較對照組升高（P＜0.05），維甲酸干預(yù)組較COPD組下降（P＜0.05），環(huán)孢素A干預(yù)組較COPD組升高（P＜0.05），老年組較成年組均升高（P＜0.05）。
　　2.臨床實驗結(jié)果
　?。?）人肺組織中Foxp

8、3蛋白表達在COPD組較對照組降低（P＜0.05），老年對照組及COPD組較成年各組均降低（P＜0.05）。ROR蛋白表達在COPD組較對照組升高（P＜0.05），老年對照組及COPD組較成年各組均升高（P＜0.05）。
　?。?）人血清IL-10的表達在COPD組較對照組降低（P＜0.05），老年對照組及COPD組較成年各組均降低（P＜0.05）。IL-17的表達在COPD組較對照組顯著增高（P＜0.05），老年對照組及COPD

9、組較成年各組均升高（P＜0.05）。老年COPD中IL-10的表達在重度組較輕中度組降低（P＜0.05）；IL-17的表達在重度組較輕中度組增高（P＜0.05）。
　?。?）直線相關(guān)分析顯示在臨床實驗中IL-10的表達與FEV1(%)均呈正相關(guān)（P＜0.05）。IL-17與FEV1(%)呈負相關(guān)（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.24月大鼠為老年大鼠。
　　2.在COPD中Treg、Foxp3、IL-10表達