青藤堿對類風濕關節(jié)炎模型小鼠BMDC表面模式識別受體TLR2-TLR4的免疫調節(jié)機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：既往研究發(fā)現(xiàn)青藤堿能影響模式識別受體下游的分子信號轉導及表達，但其機理有待深入研究。本課題提出青藤堿可能通過影響模式識別受體進而治療類風濕關節(jié)炎的假說。通過離體培養(yǎng)RA動物骨髓來源的DC,探索青藤堿對RA小鼠模式識別受體的影響，評價其在RA發(fā)病機制及病情進展中的作用，為青藤堿臨床應用及上市后的評價提供實驗室依據。
　　方法：SPF級 balb/c小鼠，依據文獻進行改良后建立膠原誘導型類風濕關節(jié)炎模型（CIA），造模成功后脫頸

2、處死小鼠，按照文獻改良后進行骨髓來源的DC培養(yǎng)，第5天時加入LPS刺激DC成熟，在第6天時采用流式細胞直接免疫熒光標記法對所得的細胞檢測 CD11c，CD86的表達情況以鑒定 DC細胞。把培養(yǎng)成熟的DC分為青藤堿高劑量組、青藤堿中劑量組、青藤堿低劑量組、模型組、空白組、甲氨蝶呤組，各組予以不同濃度青藤堿干預24小時后運用流式細胞技術檢測 TLR2、TLR4的表達情況，并將細胞培養(yǎng)上清液采用elisa法檢測其 IL-1、IL-10、TNF

3、-α的水平。所有實驗數(shù)據采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結果：1、牛Ⅱ型膠原聯(lián)合完全弗氏佐劑對小鼠進行尾根部、腹部、足墊注射后在35天左右誘導出RA模型；2、IL-4及GM-CSF在第5天左右能夠誘導骨髓源細胞轉化為DC且DC在培養(yǎng)過程中常常處于集落狀態(tài)；3、模型組小鼠 TLR2、TLR4的表達明顯高于空白組小鼠，提示類風濕關節(jié)炎造模過程可能影響小鼠 BMDC表面 TLR的表達；4、青藤堿干預后能夠降低小鼠 BMDC表

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