17β-雌二醇對(duì)大鼠脂肪源性干細(xì)胞Ⅰ型及Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、本文從以下幾方面進(jìn)行論述：
　　第一部分 大鼠ADSCs的分離、培養(yǎng)及多向分化潛能研究
　　目的：
　　研究培養(yǎng)、分離、純化以及鑒定ADSCs所使用的實(shí)驗(yàn)方法，進(jìn)而使它本身的生物學(xué)特點(diǎn)、表面抗原特點(diǎn)等得以明確，同時(shí)確定它本身在成骨、成脂肪方面所具有的潛能。這樣就可以確定ADSCs本身所具有的定向分化能力，進(jìn)而為將其應(yīng)用于細(xì)胞治療POP提供可靠的理論依據(jù)。
　　方法：
　　在培養(yǎng)大鼠ADSCs細(xì)胞時(shí)，主要采用

2、酶消化法。在觀察ADSCs細(xì)胞結(jié)構(gòu)時(shí)，需要借助倒置顯微鏡來完成。在研究此種細(xì)胞的生存特點(diǎn)時(shí)，需要使用MTT進(jìn)行檢測(cè)，并應(yīng)用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)確定抗原表達(dá)水平;借助將ADSCs向成骨、成脂細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化，進(jìn)而研究此種細(xì)胞的分化水平。
　　結(jié)果：
　　通過觀察可以發(fā)現(xiàn)，體外培養(yǎng)所得到的ADSCs增殖速度較快，其大都為纖維狀細(xì)胞。細(xì)胞形態(tài)分布較為均勻，以多角形與長(zhǎng)梭形為主。這樣在傳代的過程中，潛伏期持續(xù)時(shí)間為一至兩天，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期在三至

3、五天，一周后即可進(jìn)入“s”形生長(zhǎng)期。通過第三代細(xì)胞流式鑒定后，發(fā)現(xiàn)CD29、CD44、CD105表現(xiàn)出陽性，對(duì)于CD34、CD45表現(xiàn)出陰性，持其為間充質(zhì)來源干細(xì)胞。ADSCs向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)28d后茜素紅染色陽性;在細(xì)胞誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞內(nèi)存在脂滴。應(yīng)用油紅“O”對(duì)其進(jìn)行染色，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞呈橘紅色。
　　結(jié)論：
　　ADSCs取材方便，易于分離培養(yǎng)，體外培養(yǎng)增殖穩(wěn)定，能夠向成骨、成脂細(xì)胞誘導(dǎo)分化，具有定向分化的能力，能夠作為種

4、子細(xì)胞治療PFD.。
　　第二部分 17β-雌二醇對(duì)大鼠脂肪源性干細(xì)胞增殖及膠原蛋白合成的影響
　　目的：
　　確定應(yīng)用雌激素后大鼠ADSCs增殖、Ⅰ和Ⅲ型膠原蛋白mRNA表達(dá)過程以及蛋白合成的影響，這樣就可以將雌激素與ADSCs同步使用后進(jìn)行治療，從而為POP提供一定的參考。
　　方法：
　　1、在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的過程中，實(shí)驗(yàn)組設(shè)定了不同濃度的17β-雌二醇（濃度依次為10-7、10-8、10-9、10-10、

5、10-11M。對(duì)照組培養(yǎng)基中，不注入17β-雌二醇。所使用的細(xì)胞為3代大鼠ADSCs1周。在檢測(cè)細(xì)胞增殖水平時(shí)，應(yīng)用MTT比色法。
　　2.分別使用不同濃度實(shí)驗(yàn)組以及對(duì)照組所設(shè)定的培養(yǎng)基培養(yǎng)第三代大鼠DSCs，時(shí)間為七天、十四天、二十一天。應(yīng)用Western blot技術(shù)確定不同類型膠原蛋白量的表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果：
　　1.MTT法檢測(cè)結(jié)果:不同實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞在生長(zhǎng)過程中均呈現(xiàn)出“S”型特點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)組大鼠在第三