17β-雌二醇及Wnt-β-catenin信號(hào)通路對(duì)人成骨肉瘤細(xì)胞基質(zhì)Gla蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察17β-雌二醇(17β-E2)對(duì)人成骨肉瘤細(xì)胞(MG63)中基質(zhì)Gla蛋白(MGP)表達(dá)的影響,及Wnt/β-catenin信號(hào)通路在其中的作用,探討MGP在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥中可能的分子機(jī)制。
　　方法:取人成骨肉瘤細(xì)胞MG63細(xì)胞株復(fù)蘇,于含5％CO2、370C培養(yǎng)箱中培養(yǎng),培養(yǎng)液為含有10%FBS的無酚紅MEM培養(yǎng)液,細(xì)胞達(dá)匯片后按5×105細(xì)胞/瓶接種于25cm2培養(yǎng)瓶,細(xì)胞培養(yǎng)液每2天換一次。MG63細(xì)胞體積達(dá)到

2、90%左右時(shí),改用含1%BSA的無血清MEM培養(yǎng)液培養(yǎng)2天,再分別進(jìn)行以下藥物干預(yù):(1)17β-E210-10、10-8、10-6mol/l、ICI10-7mol/l、ICI10-7mol/l+17β-E210-8mol/l干預(yù)48小時(shí);(2)17β-E210-8mol/l、DKK-1200ng/ml、17β-E210-8mol/l+DKK-1200ng/ml干預(yù)48小時(shí);(3)17β-E210-8mol/l、華法林10-5mol/l

3、、17β-E210-8mol/l+華法林10-5mol/l干預(yù)48小時(shí),均以1%BSA的無血清MEM培養(yǎng)液作為對(duì)照組,干預(yù)后提取RNA及總蛋白。用熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR及Western-blot技術(shù)檢測(cè)MGP、β-catenin、Runx2、LRP5基因及蛋白表達(dá)的情況。
　　結(jié)果:1、17β-E2能上調(diào)MGP的表達(dá)。10-10mol/l、10-8mol/l、10-6mol/l、MGP mRNA的表達(dá)是對(duì)照組的4.63倍、7.1

4、6倍、,2.95倍(P<0.05),MGP蛋白的表達(dá)分別是對(duì)照組的1.17倍、1.58倍、1.28倍,以10-8mol/l的濃度的作用最明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。10-7 mol/L雌激素受體抑制劑ICI182780與對(duì)照組相比MGP表達(dá)無顯著差異(P>0.05),與17β-E2聯(lián)合作用時(shí)可阻斷17β-E2的作用,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2、17β-E2增加Wnt/β-catenin經(jīng)典信號(hào)通路中相關(guān)蛋白β-c

5、atenin、LRP5、Runx2的表達(dá),Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制劑DKK-1下調(diào)β-catenin、LRP5、Runx2的表達(dá),DKK-1與17β-E2聯(lián)用能抑制17β-E2對(duì)MGP的上調(diào)作用,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3、MGP抑制劑華法林下調(diào)MGP的表達(dá),同時(shí)華法林與17β-E2聯(lián)用能抑制17β-E2對(duì)β-catenin、LRP5、Runx2的上調(diào)作用,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:17