基質(zhì)Gla蛋白對人成骨肉瘤MG63細胞株骨形成及Wnt-β-catenin信號通路的影響.pdf

1、目的：1、觀察人成骨肉瘤MG63細胞株中MGP基因表達改變對其骨形成的影響；2、觀察MGP對人成骨肉瘤細胞MG63中Wnt/β-catenin信號通路相關因子的影響，探討MG P在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥防治作用中可能的新機制。
　　方法：1、MGP基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染：將 MG63細胞分成 MGP過表達組及MGP敲低組，過表達組用重組質(zhì)粒 pIRES2-EGFP（過表達對照組）及pIRES2-EGFP-MGP（過表達組）轉(zhuǎn)染至MG63，敲低

2、組用重組質(zhì)粒pKLO-EGFP（敲低對照組，）及 pKLO-EGFP-shRNA（敲低組）轉(zhuǎn)染至 MG63細胞中；2、MG63細胞骨形成能力檢測：MG63細胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，用CCK-8法檢測細胞增殖情況，堿性磷酸酶（ALP）染色及活力測定技術檢測MG63細胞的分化情況，茜素紅 S染色及氯化十六烷基吡啶半定量礦化結(jié)節(jié)檢測細胞礦化能力；3、Wnt/β-catenin信號通路相關因子的檢測：采用Western blot和 QRT-PCR技術檢測

3、各組MGP及Wnt/β-catenin信號通路相關因子如wnt3a、β-catenin和 Runx2蛋白及基因的表達情況。
　　結(jié)果：1、CCK-8試驗結(jié)果顯示過表達MGP48、72、96小時時MG63的增殖明顯增加（*P<0.05），而MGP敲低組中MG63的增殖并無明顯的影響，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；2、ALP染色及活力測定試驗均顯示，過表達MGP增強了 MG63細胞的分化能力，過表達組 ALP活力約是對照組的3倍，

4、相反，敲低MGP則抑制了MG63細胞的分化，與對照組相比，敲低組ALP活力約降低了2倍，差異具有統(tǒng)計學意義（*P<0.05）；3、茜素紅S染色及氯化十六烷基吡啶試驗顯示MGP可促進成骨細胞的礦化，下調(diào)MGP后MG63細胞的礦化被抑制，差異均具有統(tǒng)計學意義（*P<0.05）；4、過表達 MGP上調(diào) Wnt/β-catenin信號通路中三個重要因子wnt3a,β-catenin和 Runx2的表達，wnt3a,β-catenin和Runx2

5、 mRNA表達分別是對照組的5.94倍、4.03倍、9.23倍，蛋白的表達分別是對照組的2.73倍、2.32倍、2.28倍，差異均具有統(tǒng)計學意義（*P<0.05,**P<0.01），反之，敲低MGP下調(diào)wnt3a,β-catenin和Runx2的表達，差異均具有統(tǒng)計學意義（*P<0.05,**P<0.01）。
　　結(jié)論：1、促進成骨細胞的增殖、分化及礦化可能是 MG P防治骨質(zhì)疏松的機制之一；2、MGP可能通過上調(diào)Wnt/β-ca