齊墩果酸衍生物-SZC014誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡及自噬的機(jī)制研究.pdf

1、目的:齊墩果酸(Oleanic acid,OA)溶解度差,生物利用度低,大大影響其療效。本課題為研究一種新合成OA衍生物,SZC014,體外抗乳腺癌作用及其潛在的分子機(jī)制。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)研究采用:(1) MTT法檢測不同濃度SZC014對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞以及人正常乳腺上皮細(xì)胞MCF-10A細(xì)胞增殖活性的影響;(2)通過細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn),研究SZC014對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7生物學(xué)

2、功能的抑制作用;(3)光鏡和電子透射顯微鏡分別觀察SZC014對(duì)MCF-7細(xì)胞形態(tài)變化以及自噬的影響;(4)流式AV-PI雙染法檢測SZC014對(duì)MCF-7細(xì)胞凋亡百分率的影響;(5)流式DCFH-DA熒光染色檢測SZC014處理后MCF-7細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的變化;(6)采用Westernblot方法檢測經(jīng)SZC014處理后,細(xì)胞相關(guān)功能蛋白質(zhì)水平的變化。
　　結(jié)果:(1)與空

3、白對(duì)照組相比,SZC014能夠顯著抑制人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7和MDA-MB-231)的增殖活性(P＜0.05),并呈現(xiàn)時(shí)間劑量依賴性,而對(duì)人乳腺上皮細(xì)胞(MCF-10A)抑制作用較弱(P＞0.05),表明SZC014對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖具有選擇性抑制作用。(2)與空白對(duì)照組相比,SZC014能顯著降低MCF-7細(xì)胞的遷移距離和細(xì)胞集落數(shù)目,且呈現(xiàn)劑量依賴性,表明SZC014能夠抑制MCF-7細(xì)胞遷移遠(yuǎn)處能力和克隆形成能力。(3)與空白對(duì)照

4、組相比,SZC014處理MCF-7細(xì)胞可以明顯提高凋亡細(xì)胞百分比和Bax/Bcl-2蛋白比值,降低caspase-3、caspase-9蛋白表達(dá),進(jìn)一步表明SZC014能夠誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生凋亡。(4)與空白對(duì)照組相比,SZC014處理MCF-7細(xì)胞后,通過電子透射顯微鏡可以看到MCF-7細(xì)胞胞漿中明顯的自噬小體生成,并且LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)變明顯增多,表明SZC014能誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生自噬。(5)與空白對(duì)照組相比,SZC

5、014處理后,MCF-7細(xì)胞中ROS的生成量明顯增多,表明SZC014能促進(jìn)細(xì)胞ROS生成。(6)與空白對(duì)照組相比,SZC014處理后,MCF-7細(xì)胞中Akt和p-Akt、p65和p-p65的蛋白水平均明顯下降,表明SZC014可通過調(diào)節(jié)Akt/NF-κB信號(hào)通路發(fā)揮抗腫瘤的作用。
　　結(jié)論:本研究揭示了SZC014通過Akt/NF-κB信號(hào)通路刺激ROS大量生成,誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡和自噬,從而抑制細(xì)胞增殖與遷移,本研究