O-糖鏈的非還原性解離及同時PMP衍生化的方法研究.pdf

1、本文建立了以β-消除反應(yīng)為基礎(chǔ)的O-糖鏈的非還原性解離及同時PMP衍生化標記的新方法，得出以下結(jié)果：
　　 ⑴把PMP衍生化與其它幾種常見衍生化方法(AEC、ABEE、2-AP、2-AB)進行了比較，結(jié)果表明PMP衍生化方法具有明顯優(yōu)點：第一，PMP衍生化方法簡單，衍生化產(chǎn)物穩(wěn)定；第二，比較AEC、ABEE、2-AP、2-AB、PMP5種衍生化產(chǎn)物的ESI-MS檢測結(jié)果，PMP的衍生化產(chǎn)物質(zhì)譜信號相對豐度強，檢測靈敏度高；第三，

2、PMP衍生化方法在堿性條件下進行，與β-消除反應(yīng)具有相容性
　　 ⑵以粘蛋白(mucin)為材料，利用PMP衍生反應(yīng)體系發(fā)展非還原性O(shè)-糖鏈解離方法，選擇氨水作為堿性介質(zhì)；反應(yīng)溫度設(shè)置為50℃；反應(yīng)時間設(shè)置為20 h；氨水：0.5 M的PMP甲醇溶液(體積比)=1：1；糖蛋白：PMP(摩爾比)=1：4。通過此新反應(yīng)體系，我們得到還原性O(shè)-糖鏈，且其還原端在解離的同時被PMP標記，解離與衍生化反應(yīng)完全，衍生產(chǎn)物穩(wěn)定。
　　

3、 ⑶用非還原性解離新方法，我們對粘蛋白和胎牛蛋白的O-糖鏈進行非還原性解離，并用ESI-MS進行分析。糖鏈經(jīng)PMP衍生化后，疏水性提高，產(chǎn)物無立體異構(gòu)體，在245 nm處有很強的紫外吸收，可對其進行ESI-LC-MS分析，并進行方法學(xué)考察，色譜條件：流動相為22：78～30：70的乙腈-水(0.01 mol·L-4的醋酸銨緩沖液，pH=5.5)，梯度洗脫60 min，流速為200μL·min-1，檢測器為紫外檢測器。實現(xiàn)了對粘蛋白中O-