miRNA-222對口腔鱗癌細胞株OSCC-15生物學功能影響的研究.pdf

1、目的：口腔鱗癌（oral squamous cell carcinomas OSCC）是口腔頜面部常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率約占口腔頜面部惡性腫瘤的80％以上[1]，且呈逐年不斷上升的趨勢。目前臨床上口腔鱗癌的治療方法主要包括手術切除、放療、化療、生物治療等，但療效不佳，預后較差。因此，探索口腔鱗癌新的治療方法對口腔鱗癌患者的預后有十分重要的意義。Ambros等[2]于1993年在線蟲體內(nèi)發(fā)現(xiàn)第一個microRNA(miRNA)，即li

2、ne-4，其參與調(diào)節(jié)了線蟲的發(fā)育進程。Calin等[3]于2002年最先報道了 miRNA在腫瘤發(fā)生中的作用。此后不斷有研究證明 miRNA在腫瘤細胞增殖、分化、凋亡過程中起到了十分重要的作用。因此，miRNA成為腫瘤診治新的研究方向。miRNA-222是 miRNA家族中重要的一員，研究發(fā)現(xiàn)， miRNA-222在多種腫瘤中表達異常，且miRNA-222的異常表達影響到腫瘤細胞的增殖、凋亡及遷移等生物學功能。龐新亞等[4]發(fā)現(xiàn)miRN

3、A-221、miRNA-222在肝癌組織中表達上調(diào)；陶宣辰等[5]在HepG2肝癌細胞系體外實驗中發(fā)現(xiàn)，上調(diào)miRNA-222的表達時，PTEN表達受到抑制，HepG2細胞的增殖和侵襲能力增強。Gillies和LorimerL[6]在腦膠質細胞瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，miRNA-221／222可以與p27kipl mRNA的3'-UTR結合，降低p27kipl的表達。當下調(diào)腦膠質瘤細胞中 miRNA-221／222的表達時， p27kipl的蛋

4、白表達量上調(diào)，明顯地將腦膠質細胞瘤 U251細胞株阻滯在 G1期，降低膠質細胞瘤細胞U251的增殖。本實驗通過研究 miRNA-222對口腔鱗癌細胞株 OSCC-15增殖、凋亡及遷移等生物學功能的影響，探討miRNA-222在口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為口腔鱗癌的早期診斷、治療及預后提供參考依據(jù)。
　　方法：
　　1.口腔鱗癌細胞株OSCC-15的復蘇、培養(yǎng)、傳代及凍存。
　　2.將人工合成的miRNA-222抑制物（

5、inhibitor）及miRNA-222模擬物（mimics）瞬時轉染口腔鱗癌細胞株OSCC-15，同時設置空白對照組。
　　3.MTS試劑盒分別于0h、24h、48h、72h處理各組細胞，酶標儀檢測miRNA-222 inhibitor組、miRNA-222 mimics組及空白對照組三組細胞的吸光度值，并繪制細胞增殖曲線。
　　4.應用Annexin V/PI雙染試劑盒處理各組細胞，流式細胞術分別檢測miRNA-222

6、inhibitor組、miRNA-222 mimics組及空白對照組三組細胞凋亡率。
　　5.細胞劃痕實驗檢測miRNA-222 inhibitor組、miRNA-222 mimics組及空白對照組三組細胞遷移率。
　　6.結果判定及統(tǒng)計學分析
　　應用 SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，口腔鱗癌細胞株OSCC-15細胞的吸光度值以均數(shù)±標準差(X±S)表示，采用完全隨機的兩獨立樣本t檢驗比較各組細胞吸光度值的差

7、異，采用χ2檢驗比較各組細胞凋亡率的差異，采用完全隨機的兩獨立樣本t檢驗比較各組遷移率間的差異，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.miRNA-222對口腔鱗癌細胞株OSCC-15吸光度和增殖率的影響
　　1.1.0h時，空白對照組的吸光度值為1.318±0.061， miRNA-222 inhibitor組的吸光度值為1.141±0.040，miRNA-222 inhibitor組較空白對照組降低，

8、差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；miRNA-222 mimics組的吸光度值為1.594±0.138，miRNA-222 mimics組較空白對照組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　1.2.24h時，空白對照組的吸光度值為2.128±0.150， miRNA-222 inhibitor組的吸光度值為1.733±0.130，miRNA-222 inhibitor組較空白對照組降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；mi

9、RNA-222 mimics組的吸光度值為2.752±0.106，miRNA-222 mimics組較空白對照組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　　1.3.48h時，空白對照組的吸光度值為2.426±0.124， miRNA-222 inhibitor組的吸光度值為2.155±0.057，miRNA-222 inhibitor組較空白對照組降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；miRNA-222 mimics組的吸光度

10、值為2.791±0.125，miRNA-222 mimics組較空白對照組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　1.4.72h時，空白對照組的吸光度值為2.806±0.163， miRNA-222inhibitor組的吸光度值為2.423±0.053，miRNA-222 inhibitor組較空白對照組降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；miRNA-222 mimics組的吸光度值為3.369±0.409，miRNA-

11、222 mimics組較空白對照組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　1.5.miRNA-222 inhibitor組0h、24h、48h、72h的增殖率分別是85.57%、81.44%、88.83%、86.35%，低于空白對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；miRNA-222 mimics組0h、24h、48h、72h的增殖率分別是120.94%、129.32%、115.04%、163.54%，高于空白對照組，

12、但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　2.miRNA-222對口腔鱗癌細胞株OSCC-15凋亡的影響
　　miRNA-222 inhibitor組的細胞凋亡率為9.58%，高于空白對照組的細胞凋亡率6.11%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；miRNA-222 mimics組的細胞凋亡率為2.25%，低于空白對照組的細胞凋亡率6.11%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　　3.miRNA-222對口腔鱗癌細胞

13、株OSCC-15遷移的影響
　　24h，48h，72h，miRNA-222 inhibitor組的遷移率分別是17.9%、19.4%、20.6%，空白對照組的遷移率分別是23.7%、29.4%、36.4%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。miRNA-222 mimics組的遷移率分別是47.9%、67.8%、78.9%，miRNA-222 mimics組與空白對照組之間的差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論：miR