腦通湯對輕度血管性癡呆治療作用及機制探討.pdf

1、目的:
　　1)探討腦通湯免煎顆粒治療輕度血管性癡呆（氣虛血瘀證）的臨床療效。
　　2)通過觀察腦通湯對缺氧/缺糖損傷后海馬星形膠質細胞Nf-kB信號通路介導的炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6基因表達和Nf-kB分泌的干預作用，探討海馬星形膠質細胞的抗炎機制。
　　3)通過觀察腦通湯對缺氧/缺糖損傷后海馬星形膠質細胞Nrf2/ARE信號通路介導的抗氧化酶HO-1、NQO1基因表達和Nrf2分泌的干預作用，探討海

2、馬星形膠質細胞的抗氧化機制。
　　4)通過觀察腦通湯對缺氧/缺糖損傷后海馬星形膠質細胞BDNF及其受體TrkB基因表達和BDNF分泌的干預作用，探討海馬星形膠質細胞對NVU的保護機制。
　　方法:
　　1)按標準將符合輕度血管性癡呆的56例患者隨機分為治療組（28例）和對照組（28例），治療紐采用腦通湯免煎顆粒治療;對照組采用安理申治療，兩組治療均為期6個月。觀察分析治療前后的MMSE、ADL積分及中醫(yī)癥狀積分變化，運

3、用尼莫地平療效判定標準評定臨床療效，并觀測實驗藥物的安全性。
　　2)通過海馬星形膠質細胞原代培養(yǎng)、鑒定以及制備腦通湯含藥血清，為下一部實驗的進行做準備。采用缺氧/缺糖方式進行造模，然后MTT比色法測定海馬星形膠質細胞缺氧缺糖24h復氧復糖2h時間點的活性劑存活率;將海馬星形膠質細胞隨機分為6組，分別為:正常細胞組、模型組、正常血清組、大、中、小劑量腦通湯含藥血清組。除正常細胞組外，其余各組均進行缺氧/缺糖處理，其中含藥血清組提前

4、添加含藥血清進行干預。缺氧/缺糖處理厲通過實時熒光定量PCR法檢測海馬星形膠質細胞Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA;Nf-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA;BDNF、TrkBmRNA的基因表達;通過ELISA檢測海馬星形膠質細胞Nrf2、Nf-κB、BDNF的分泌。
　　結果:
　　1)治療組與對照組藥物均能明顯改善VD患者的認知功能、日常生活能力及中醫(yī)癥候，而且治療組療效與對照組相比無明顯差異。結果表

5、明腦通湯免煎顆粒在改善患者認知功能、日常生活能力和中醫(yī)臨床療效方面療效顯著，而且腦通湯免煎顆粒在改善患者上述各方面能力與西藥安理申無明顯差異。用藥過程中，治療紐無明顯不良反應，安全性良好。
　　2)經過海馬星形膠質細胞原代培養(yǎng)、鑒定及制備腦通湯含藥血清，本實驗成功獲得了海馬星形膠質細胞以及腦通湯含藥血清，為下一步實驗奠定了基礎。經過MTT比色法發(fā)現(xiàn)24h和2h為本實驗的最佳缺氧缺糖和復氧復糖時間點。海馬星形膠質細胞實時熒光定量PC

6、R顯示:與正常細胞組比較，模型紐Nrf2、HO-1、NQO1、Nf-κ B、TNF-α、IL-1β、IL-6的相對表達量表達明顯升高(P＜0.05)，而模型組BDNF、TrkBmRNA的相對表達量表達明顯降低。與模型組比較，不同劑量腦通湯含藥血清組Nrf2、HO-1、NQO1、BDNF、TrkB mRNA的相對表達量表達明顯升高(P＜0.05)，而Nf-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA的相對表達量表達明顯降低(P＜0.0

7、5)。但正常血清組與模型組比較上述各種基因表達均無顯著差異(p＞0.05)。ELISA檢測Nrf2、Nf-κ B、BDNF蛋白的變化情況與其相應mRNA具有一致性。
　　結論：
　　1)腦通湯免煎顆粒能明顯改善輕度血管性癡呆氣虛血瘀證患者臨床癥狀，提高臨床療效，為臨床治療輕度血管性癡呆氣虛血瘀證患者提供了有效制劑。
　　2)缺氧/缺糖模型能很好的模擬海馬星形膠質細胞腦缺血再灌注損傷。腦通湯對缺氧/缺糖損傷的海馬星形膠質

8、細胞的抗炎、抗氧化具有調節(jié)作用，且能增強星形膠質細胞對整個NUV的保護作用。其作用機制，與本方能抑制缺氧/缺糖損傷時由Nf-kB信號通路介導的炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6的基因表達以及Nf-kB分泌，減輕其介導的炎癥反應有關;與本方能上調缺氧/缺糖損傷由Nrf2/ARE信號通路介導的抗氧化酶HO-1、NQO1的基因表達以及Nrf2分泌，對抗氧化應激對星形膠質細胞的損傷有關;與本方能上調缺氧/缺糖損傷BDNF及其受體TrkB的