調(diào)理肝脾法辨治雜病的理論與實(shí)驗(yàn)研究——當(dāng)歸芍藥散加味對(duì)乳腺增生模型大鼠乳腺上皮細(xì)胞凋亡、P53基因表達(dá)的影響.pdf

1、通過(guò)對(duì)雜病及調(diào)理肝脾法相關(guān)文獻(xiàn)的梳理，認(rèn)為氣血陰陽(yáng)之變是產(chǎn)生雜病的病理基礎(chǔ)，而肝脾二臟是人體氣血陰陽(yáng)產(chǎn)生、運(yùn)行、調(diào)節(jié)的核心;又雜病的辨治以臟腑辨證為主，而臟腑辨證中以肝脾為核心。故“調(diào)理肝脾法”對(duì)于雜病的治療具有較高臨床意義。近年來(lái)，雜病的辨治思維還被運(yùn)用于乳腺增生病的臨床與實(shí)驗(yàn)研究中。本課題在“肝、脾”兩臟在乳腺增生病發(fā)生中的作用的探討及當(dāng)歸芍藥散證治機(jī)理研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)行當(dāng)歸芍藥散加味對(duì)乳腺增生模型大鼠乳腺上皮細(xì)胞凋亡、P53基因表

2、達(dá)的影響的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。
　　目的:
　　通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察當(dāng)歸芍藥散加味對(duì)乳腺增生大鼠乳腺上皮細(xì)胞凋亡、P53基因表達(dá)的影響，探討當(dāng)歸芍藥散加味治療乳腺增生病的機(jī)理，為中醫(yī)藥從調(diào)理肝脾法論治療乳腺增生及防治乳腺癌提供一定的科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　將40只SPF級(jí)SD雌性未孕健康大鼠，通過(guò)自由飲水進(jìn)食、自然光照，適應(yīng)環(huán)境1周后，采用分層隨機(jī)法，將大鼠分為實(shí)驗(yàn)組32只、空白對(duì)照組8只。空白對(duì)照組于肌肉注射生理鹽水

3、;實(shí)驗(yàn)組于雌、孕激素序貫法造模。30天后，再將實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)分為模型1組、模型2組、當(dāng)歸芍藥散加味組、乳癖消組，各8只。同時(shí)將模型組1大鼠處死，并留取標(biāo)本，置于光鏡下觀察其乳腺組織，以證實(shí)大鼠乳腺增生病的病理模型造模成功。造模成功后，空白對(duì)照組及模型2組均給予生理鹽水;乳癖消組予乳癖消，用生理鹽水配成混懸液;當(dāng)歸芍藥散加味組予“當(dāng)歸芍藥散加味”藥液。連續(xù)30天的灌胃后處死，全部實(shí)驗(yàn)大鼠留取大鼠乳腺組織標(biāo)本，測(cè)量各大鼠乳頭的直徑及高度;觀察乳

4、腺組織的病理變化;同時(shí)運(yùn)用TUNEL法檢測(cè)各組大鼠乳腺上皮細(xì)胞凋亡及計(jì)算其凋亡指數(shù);PCR方法檢測(cè)大鼠乳腺組織樣本中P53基因的表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　?、偃轭^直徑及高度的比較
　　實(shí)驗(yàn)組各組的大鼠乳頭直徑、高度均大于空白組，有顯著性差異(P＜0.01);模型1組及模型2組大鼠乳頭直徑及高度無(wú)顯著性差異(P＞0.05);乳癖消組及當(dāng)歸芍藥散加味組大鼠乳頭直徑、高度無(wú)顯著性差異(P＞0.05);模型1、2組大鼠乳頭直徑及

5、高度均大于乳癖消組及當(dāng)歸芍藥散加味組，有顯著性差異(P＜0.01)。
　?、诩?xì)胞凋亡指數(shù)的比較
　　各實(shí)驗(yàn)組的大鼠乳腺的細(xì)胞凋亡均低于空白組，有顯著性降低(P＜0.01);其中模型1、2組的細(xì)胞凋亡指數(shù)最低，兩組之間無(wú)明顯差異(P＞0.05);當(dāng)歸芍藥散加昧組及乳癖消組的大鼠乳腺的細(xì)胞凋亡指數(shù)均大于模型1、2組，差異顯著(P＜0.01)，但兩組之間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　?、跴53基因表達(dá)的比較
　　各實(shí)

6、驗(yàn)組的大鼠乳腺組織P53基因表達(dá)量均高于空白組，差異明顯(P＜0.01);模型1組和模型2組大鼠乳腺組織P53基因表達(dá)量無(wú)明顯差異(P＞0.05);實(shí)驗(yàn)組中的當(dāng)歸芍藥散加味組及乳癖消組的大鼠乳腺組織P53基因表達(dá)量均小于模型1、2組，差異顯著(P＜0.01);當(dāng)歸芍藥散加味組大鼠P53基因表達(dá)量小于乳癖消組，差異明顯(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　當(dāng)歸芍藥散加味有促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞凋亡及抑制乳腺組織P53基因的表達(dá)作用，其