維生素D對(duì)煙草致癌物誘發(fā)肺癌發(fā)生影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　探討維生素D對(duì)煙草致癌物誘發(fā)肺癌發(fā)生的影響
　　方法：
　　1采取灌胃的方式給予Balb/c小鼠補(bǔ)充維生素D。維生素D以無(wú)水乙醇作為溶劑，最終乙醇濃度為5％。實(shí)驗(yàn)分為空白組（補(bǔ)充5%的乙醇溶劑）、10IU維生素D組（補(bǔ)充維生素D10IU/kg/d）、20IU維生素D組（補(bǔ)充維生素D20IU/kg/d）、40IU維生素D組（補(bǔ)充維生素D40IU/kg/d）。4周后，化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清維生素D。
　　2免

2、疫組化檢測(cè)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（BMP-2）和環(huán)氧合酶2（COX-2）在人體肺癌和癌旁組織中的表達(dá)。
　　3用NNK100mg/kg一次腹腔注射A/J小鼠建立肺癌模型。NNK以生理鹽水為溶劑。維生素D以無(wú)水乙醇作為溶劑，最終乙醇濃度為5%。在注射NNK前一周開(kāi)始給予不同干預(yù)，直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。實(shí)驗(yàn)分為空白組（腹腔注射生理鹽水+補(bǔ)充5%的乙醇溶劑）、NNK組（腹腔注射 NNK+補(bǔ)充5%的乙醇溶劑）、20IU維生素 D干預(yù)組（腹腔注射NNK+

3、補(bǔ)充維生素 D20IU/kg/d）、40IU維生素 D干預(yù)組（腹腔注射NNK+補(bǔ)充維生素D40IU/kg/d）。注射NNK后16周，麻醉狀態(tài)下，眼球取血,檢測(cè)血清維生素D和鈣。對(duì)小鼠肺部腫瘤進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算肺癌發(fā)病率和發(fā)病數(shù)。對(duì)胃、肝、腎、肺等臟器進(jìn)行 HE染色，行病理分析。免疫組化檢測(cè)小鼠肺腫瘤BMP-2和COX-2蛋白的表達(dá)。
　　4用B(a)P50mg/kg/次灌胃Balb/c小鼠，一周兩次，連續(xù)五周，共計(jì)10次，建立肺癌模型

4、。B(a)P以橄欖油為溶劑。實(shí)驗(yàn)分為空白組（灌胃橄欖油+補(bǔ)充5%的乙醇溶劑）、B(a)P組（灌胃B(a)P+補(bǔ)充5%的乙醇溶劑）、20IU維生素D干預(yù)組（灌胃B(a)P+補(bǔ)充維生素D20IU/kg/d）、40IU維生素D干預(yù)組（灌胃B(a)P+補(bǔ)充維生素D40IU/kg/d）。第一次給予B(a)P后30周統(tǒng)一處死小鼠。檢測(cè)指標(biāo)同3。
　　結(jié)果：
　　1維生素D喂飼4周后，小鼠血清維生素D有所上升。空白組、10、20、40IU

5、維生素D組血清維生素D(ng/ml)分別為7.24±0.22、7.82±0.33、8.98±0.56、12.04±1.98。
　　2 BMP-2和COX-2蛋白均在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。BMP-2在肺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為77.8%（35/45），在癌旁組織中無(wú)表達(dá)（0/12）；COX-2在肺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為71.1%（32/45），癌旁組織中陽(yáng)性表達(dá)率為8.3%（1/12）。
　　3 NNK組、20IU維生素D干預(yù)組、40I

6、U維生素D干預(yù)組A/J小鼠肺癌發(fā)病率均為100%，肺癌發(fā)病數(shù)分別為1.80±0.84、1.60±0.89、1.60±0.55（p＞0.05）。各組均未見(jiàn)高鈣血癥和小鼠腎臟損傷。與NNK組相比40IU維生素D干預(yù)組和20IU維生素D干預(yù)組的體重增長(zhǎng)受到抑制(p＜0.05)；肺癌組織中BMP-2、COX-2蛋白的表達(dá)由高到低分別為NNK組、20IU維生素D干預(yù)組、40IU維生素D干預(yù)組(p＜0.05)。
　　4 B(a)P組、20IU

7、維生素D干預(yù)組、40IU維生素D干預(yù)組Balb/c小鼠肺癌發(fā)病率均為100%，肺癌發(fā)病數(shù)分別為11.90±2.77、5.40±1.90、2.40±1.35(p＜0.05)。與B(a)P組相比40IU維生素D干預(yù)組和20IU維生素 D干預(yù)組的體重增長(zhǎng)受到抑制(p＜0.05)；肺癌組織中 BMP-2、COX-2蛋白的表達(dá)由高到低分別為B(a)P組、20IU維生素D干預(yù)組、40IU維生素D干預(yù)組(p＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　

8、1經(jīng)胃腸道給予小鼠補(bǔ)充維生素D是一種安全有效的方法。
　　2 BMP-2和COX-2蛋白在肺癌組中表達(dá)增高，進(jìn)一步研究?jī)烧咴诜伟┲械淖饔脤?duì)于肺癌的防治具有重要意義。
　　3維生素D(20IU/kg/d、40IU/kg/d)對(duì)NNK誘發(fā)A/J小鼠肺癌的發(fā)病率和發(fā)病數(shù)沒(méi)有影響，但是維生素D能抑制BMP-2和COX-2在肺癌中的表達(dá)。說(shuō)明維生素D在不影響腫瘤發(fā)病率和發(fā)病數(shù)的情況下，仍然能通過(guò)抑制腫瘤標(biāo)記物的表達(dá)而發(fā)揮抑癌作用。