Mir-181a和PLGF與子癇前期疾病的相關(guān)性研究.pdf

1、子癇前期(preeclampsia，PE)，是妊娠期常見并發(fā)癥，發(fā)病率約為4％-7％，病情嚴重者可危及孕婦的健康和圍產(chǎn)期嬰兒的生命。其臨床表現(xiàn)是妊娠20周后，出現(xiàn)持續(xù)高血壓、蛋白尿和水腫等。如未行治療，子癇前期經(jīng)過長短不一的時間，會突然發(fā)作成為子癇，危及母嬰生命。子癇是引起孕產(chǎn)婦死亡的主要原因之一，在我國其引起孕產(chǎn)婦的死亡率高達2％-5％。目前認為子癇前期是一種復(fù)雜的、由多元因素導(dǎo)致的疾病。已知血管的發(fā)生和發(fā)展、胎盤生長、免疫調(diào)節(jié)機制、

2、氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)等的變化與子癇前期的發(fā)病密切相關(guān)。而胎盤的因素尤為重要，因為移除胎盤后子癇前期的癥狀可以快速得到改善。
　　但是，目前仍然缺乏有效預(yù)測子癇前期的手段。所以，本課題擬從胎盤中顯著表達的微小RNA及胎盤生長因子出發(fā)，希望找出預(yù)測子癇前期的marker分子，以期對子癇前期早發(fā)現(xiàn)，最終早診斷，早治療。
　　第一部分:
　　微小RNA(MicroRNA，miRNA)的發(fā)現(xiàn)及其機制與功能的研究是近年生命科學(xué)領(lǐng)域中的重大

3、進展之一。miRNA是真核細胞中一大類參與基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的非編碼小分子RNA。雙鏈成熟miRNA的意義鏈進入RISC(RNA-induced silencingcomplex)，與靶基因mRNA的3'-非翻譯區(qū)(untranslation region，UTR)上互補序列結(jié)合，造成靶mRNA的降解或翻譯抑制，從而發(fā)揮miRNA對靶基因表達的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用。miRNA基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生一個初始轉(zhuǎn)錄本，稱為miRNA前體（pri-miR），它長達

4、成百上千個核苷酸，擁有一個33bp左右的莖環(huán)結(jié)構(gòu)，在核糖核酸酶Drosha和Dicer的剪切下成為成熟的miRNA。許多miRNA高度保守，其表達具有組織特異性，反映出了它們所具有重要的生理功能，在包括細胞增殖、分化和凋亡等多種細胞生長和發(fā)育過程的調(diào)節(jié)過程中起著重要作用。一種蛋白質(zhì)的表達往往受多種miRNA調(diào)控，單一miRNA也可以同時調(diào)控多種蛋白質(zhì)的表達。這一特性使得從miRNA入手研究子癇前期的發(fā)病機理具有取得重大突破的可能。研究表

5、明，多種miRNA在胎盤中大量表達，miRNA在胎盤中的異常表達可能是引發(fā)子癇前期的原因之一。Pineles等最早在子癇前期不伴隨小于胎齡兒(SGA)和子癇前期伴隨小于胎齡兒(SGA)兩組病理疾病中報道了胎盤中miRNA的差異表達;同時，與正常孕婦相比，重度子癇前期患者中也發(fā)現(xiàn)了差異表達的miRNA。針對特定的miRNA，科學(xué)家也展開了一些對胎盤發(fā)育及子癇前期發(fā)生的影響的具體研究。2008年，Roman A等于子癇前期患者中發(fā)現(xiàn)了91種

6、相對于正常孕婦有改變的miRNA（其中38種下調(diào)，53種上調(diào)），并得出上述miRNA有成為子癇前期診斷的標志分子可能的結(jié)論。但目前miRNA對胎盤發(fā)育的影響以及其具體作用機制的研究還非常有限。
　　本課題擬從胎盤著手，選取了前期工作中外周血中差異表達最顯著的mir-181a分子作為靶向指標，探討miRNA于子癇前期患者中對胎盤滋養(yǎng)層的影響，以期對子癇前期的發(fā)病機制有一個深刻的了解。
　　第二部分:
　　胎盤生長因子(p

7、lacenta growth factor, PLGF)豐富表達于胎盤，是血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)家族成員之一。PLGF一方面通過自分泌方式促進滋養(yǎng)細胞增殖分化:另一方面通過旁分泌方式調(diào)節(jié)胎盤血管形成和生理性重鑄;同時還可對VEGF起到協(xié)同作用，顯著提高其生物學(xué)活性，促進胎盤血管發(fā)展，維持妊娠過程中胎盤正常的血供和功能，使其適應(yīng)母體和胎兒發(fā)育的需要。
　　

8、目前，大量研究表明PLGF在正常妊娠的胎盤的形成和發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用，其分泌異常也與子癇前期密切相關(guān)?；加腥焉锔哐獕海ㄓ绕涫侵囟茸影B前期）的孕婦進行胎盤生長因子的檢測，對于其預(yù)測、診斷以及其后的相關(guān)處理具有一定積極意義。
　　目的：
　　第一部分:
　　通過相關(guān)研究，將闡明(1) mir-181a對胎盤滋養(yǎng)層增殖，侵潤及遷移的影響;(2)妊娠外周血中mir-181a是否可以作為子癇前期早期診斷的標志分子。為子癇前

9、期患者的胎盤發(fā)育障礙的機制提供理論支撐，為臨床早期診斷提供候選靶標分子。
　　第二部分:
　　探究胎盤生長因子水平與妊娠高血壓疾病（重度子癇前期）的關(guān)系，旨在指導(dǎo)臨床工作，為重度子癇前期的孕婦的終止妊娠時機提供依據(jù)，探討PLGF水平變化與疾病嚴重程度的關(guān)系。
　　方法：
　　第一部分:
　　1.與正常孕婦相比，子癇前期孕婦外周血中差異表達的mir-181a（已完成）。
　　2.確認mir-181a分子

10、在胎盤滋養(yǎng)層的表達（原位雜交）。
　　3.mir-181a對人類胎盤滋養(yǎng)層細胞增殖、侵潤及遷移的影響（Transwell細胞遷移模型，Matrigel細胞侵潤模型，MTT法）。
　　4.統(tǒng)計學(xué)分析(spss19.0)
　　第二部分:
　　采用熒光免疫分析儀檢測100例妊娠期高血壓疾病患者（其中患有妊娠期高血壓的患者40例，輕度子癇前期患者30例，重度子癇前期患者30例），并和30例正常孕婦的血清PLGF水平作比較

11、。
　　結(jié)果：
　　第一部分:
　　1.驗證了mir-181a分子在胎盤滋養(yǎng)層細胞的表達
　　2.mir-181a對人類胎盤滋養(yǎng)層細胞的增殖、侵潤及遷移有促進作用
　　第二部分:
　　與正常對照組相比，重度子癇前期組的PLGF水平明顯降低(P＜0.01);血清PLGF在妊娠高血壓疾病組各亞組間比較(P＜0.01);與正常對照組相比，妊娠高血壓疾病患者的PLGF水平明顯降低(P＜0.01)。