HepG2細(xì)胞內(nèi)HPVDNA整合狀態(tài)及L1蛋白表達(dá)觀察.pdf

1、目的：了解人肝癌細(xì)胞株Hep G2細(xì)胞內(nèi)人乳頭瘤病毒（HPV）基因組的整合狀態(tài)，探討電鏡觀察下Hep G2細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)包涵體物質(zhì)的性質(zhì)，了解Hep G2細(xì)胞內(nèi)L1蛋白表達(dá)規(guī)律而進(jìn)行本研究。
　　方法：（1）培養(yǎng)Hep G2細(xì)胞、HPV18陽性細(xì)胞HeLa及HPV陰性細(xì)胞HaCaT，提取三種細(xì)胞的總DNA、總mRNA及細(xì)胞總蛋白。（2）用提取的細(xì)胞總DNA做HPV18 E2、E6的PCR擴(kuò)增，判斷Hep G2細(xì)胞內(nèi)人乳頭瘤病毒（HPV

2、）基因組的整合狀態(tài)。（3）對提取的細(xì)胞蛋白用ELISA方法檢測細(xì)胞中L1蛋白表達(dá)。（4）應(yīng)用多價(jià)小鼠抗HPV L1單克隆抗體（可檢測HPV1、6、11、16、18、31等型別）以免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western Blotting）方法以及光鏡和電鏡的免疫組織化學(xué)方法對人肝癌細(xì)胞株Hep G2細(xì)胞中L1蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測。（5）對提取的細(xì)胞RNA用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測細(xì)胞內(nèi)L1 rnRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）P

3、CR顯示Hep G2細(xì)胞內(nèi)HPV DNA基因組呈整合狀態(tài)。（2）ELISA檢測結(jié)果證實(shí)Hep G2細(xì)胞中有L1蛋白的表達(dá)。（3）免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western Blottig）方法檢測結(jié)果顯示Hep G2細(xì)胞和HeLa細(xì)胞一樣在56KD處出現(xiàn)HPV L1蛋白條帶；光鏡及電鏡免疫組織化學(xué)法檢測Hep G2細(xì)胞胞漿內(nèi)均出現(xiàn)HPV L1蛋白陽性反應(yīng)。（4）通過HPV L1的通用引物MY09/11、GP5+/6+引物對Hep G2細(xì)胞的mRNA進(jìn)