HepG2細胞內HPVDNA整合狀態(tài)及L1蛋白表達觀察.pdf

1、目的：了解人肝癌細胞株Hep G2細胞內人乳頭瘤病毒（HPV）基因組的整合狀態(tài)，探討電鏡觀察下Hep G2細胞胞質內包涵體物質的性質，了解Hep G2細胞內L1蛋白表達規(guī)律而進行本研究。
　　方法：（1）培養(yǎng)Hep G2細胞、HPV18陽性細胞HeLa及HPV陰性細胞HaCaT，提取三種細胞的總DNA、總mRNA及細胞總蛋白。（2）用提取的細胞總DNA做HPV18 E2、E6的PCR擴增，判斷Hep G2細胞內人乳頭瘤病毒（HPV

2、）基因組的整合狀態(tài)。（3）對提取的細胞蛋白用ELISA方法檢測細胞中L1蛋白表達。（4）應用多價小鼠抗HPV L1單克隆抗體（可檢測HPV1、6、11、16、18、31等型別）以免疫印跡實驗（Western Blotting）方法以及光鏡和電鏡的免疫組織化學方法對人肝癌細胞株Hep G2細胞中L1蛋白表達情況進行檢測。（5）對提取的細胞RNA用反轉錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）檢測細胞內L1 rnRNA表達。
　　結果：（1）P

3、CR顯示Hep G2細胞內HPV DNA基因組呈整合狀態(tài)。（2）ELISA檢測結果證實Hep G2細胞中有L1蛋白的表達。（3）免疫印跡實驗（Western Blottig）方法檢測結果顯示Hep G2細胞和HeLa細胞一樣在56KD處出現(xiàn)HPV L1蛋白條帶；光鏡及電鏡免疫組織化學法檢測Hep G2細胞胞漿內均出現(xiàn)HPV L1蛋白陽性反應。（4）通過HPV L1的通用引物MY09/11、GP5+/6+引物對Hep G2細胞的mRNA進