ZAG對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞內(nèi)甘油三酯沉積的影響及機(jī)制.pdf

1、目的：構(gòu)建重組人ZAG（Zinc-α2 glycoprotein）真核表達(dá)載體，并瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，觀察HepG2細(xì)胞過(guò)表達(dá)ZAG后對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)的甘油三酯沉積的影響。
　　方法：提取HepG2細(xì)胞總RNA，通過(guò)RT-PCR方法擴(kuò)增出ZAG序列，克隆入經(jīng) XhoI和 SacII雙酶切后的pIRES2-ZsGreen1，重組人 ZAG真核表達(dá)質(zhì)粒（pIRES2-ZsGreen1-hZAG）通過(guò)核苷酸測(cè)序鑒定。使用不同濃度pIRE

2、S2-ZsGreen1-hZAG的經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞24小時(shí)，western-blotting鑒定ZAG陽(yáng)性細(xì)胞，并采用棕櫚酸誘導(dǎo)該細(xì)胞脂肪變性，采用油紅O染色觀察各組細(xì)胞內(nèi)脂滴情況，酶聯(lián)免疫法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的水平。
　　結(jié)果：1.成功構(gòu)建人ZAG基因的真核表達(dá)載體pIRES2-ZsGreen1-hZAG，該載體轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后，能顯著增加ZAG蛋白的表達(dá)。
　　2.與對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)ZAG的HepG2細(xì)胞

3、能減少棕櫚酸誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量；油紅O染色結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)ZAG的HepG2細(xì)胞在棕櫚酸誘導(dǎo)后細(xì)胞內(nèi)橘紅色脂滴較對(duì)照組HepG2細(xì)胞明顯減少。
　　結(jié)論：1.構(gòu)建了ZAG基因的真核表達(dá)載體pIRES2-ZsGreen1-hZAG，并成功轉(zhuǎn)入HepG2細(xì)胞。
　　2．過(guò)表達(dá)ZAG能減少棕櫚酸誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞甘油三酯的沉積。
　　目的：探討ZAG降低棕櫚酸誘導(dǎo)的HepG2內(nèi)甘油三酯沉積機(jī)制。
　　方法：體外培

4、養(yǎng)HepG2細(xì)胞和建立ZAG瞬時(shí)過(guò)表達(dá)HepG2細(xì)胞，分別加入或不加入棕櫚酸干預(yù)，應(yīng)用Western blotting在蛋白水平檢測(cè)代謝性核受體(SREBP1c、PPARα、LXRα和FXR)、脂肪酸合成（ACC、FAS）、脂肪酸β-氧化基因表達(dá)。
　　結(jié)果：1.與對(duì)照組相比，棕櫚酸干預(yù)組SREBP-1c、LXRα、ACC、FAS的表達(dá)增加，F(xiàn)XR、PPARα的表達(dá)降低。
　　2.與空白載體組相比，過(guò)表達(dá) ZAG組 FXR和

5、 CPT1A表達(dá)增加，而SREBP-1c表達(dá)下降。
　　3.在棕櫚酸干預(yù)下，過(guò)表達(dá)ZAG組較空白載體組FXR、PPARα、CPT1表達(dá)增加，SREBP-1c、LXRα、ACC、FAS表達(dá)減少。
　　結(jié)論：1.棕櫚酸能通過(guò)增加SREBP-1c、LXRα、ACC、FAS的表達(dá)，降低PPARα、FXR的表達(dá)促進(jìn)HepG2細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的沉積。
　　2．過(guò)表達(dá)ZAG能增加FXR和CPT1A的表達(dá)，降低SREBP-1c的表達(dá)。<