麻痹性貝類毒素細(xì)胞檢測法的建立與評價(jià).pdf

1、目的:麻痹性貝類毒素(paralytic shellfish poisoning，PSP)因人食用了含有該毒素的貝類會引起人體產(chǎn)生外周神經(jīng)麻痹而得名。其特點(diǎn)是廣泛分布在世界的各個海域、毒性作用強(qiáng)、對人類致死率高等。PSP是一種鈉離子通道阻斷劑，對動物的心血管、神經(jīng)系統(tǒng)有高度的特異性。到目前為止，對此類毒素并沒有特效的解毒劑。國內(nèi)外對PSP的檢測建立了多種方法，但這些檢測方法優(yōu)缺點(diǎn)明顯，我國目前采用的是國外進(jìn)口的試劑盒檢測，其檢測成本較高

2、不利于普及。所以，建立一種簡便、靈敏、成本低適合普及的PSP檢測方法是非常必要的。
　　方法:本研究以小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤N2a為受試對象，基于細(xì)胞毒性建立PSP酶聯(lián)免疫檢測方法，即細(xì)胞檢測法。首先廣泛搜集近15年來報(bào)道的全國發(fā)生麻痹性貝類毒素食物中毒事件，進(jìn)行數(shù)據(jù)的整理和分析，對麻痹性貝類毒素食物中毒的流行病學(xué)分布進(jìn)行探討。然后使用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選出石房蛤毒素(STX)暴露N2a細(xì)胞中的差異蛋白，利用Western blot和相應(yīng)

3、的ELISA方法對差異蛋白進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。利用差異蛋白建立檢測PSP的細(xì)胞檢測法，并對此方法分別從靈敏度、特異性和重復(fù)性方面進(jìn)行評價(jià)。
　　結(jié)果:1、按照剔除標(biāo)準(zhǔn)和步驟進(jìn)入統(tǒng)計(jì)分析的文獻(xiàn)共21篇，共報(bào)道麻痹性貝類毒素食物中毒事件131起，889例，其中有69人死亡，病死率為7.76％。其中沿海地區(qū)共報(bào)道130起;第一季度報(bào)道3起，第二季度報(bào)道67起，第三季度報(bào)道59起，第四季度報(bào)道2起;食用織紋螺導(dǎo)致麻痹性貝類毒素中毒事件共124

4、起，732例病人。2、與未暴露N2a細(xì)胞總蛋白相比，STX暴露N2a細(xì)胞總蛋白中共有13個差異蛋白點(diǎn)，經(jīng)質(zhì)譜鑒定后，這13個差異蛋白點(diǎn)為9個蛋白;進(jìn)一步驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)與未暴露的N2a細(xì)胞蛋白相比，小鼠14-3-3蛋白及小鼠α烯醇化酶在STX暴露N2a細(xì)胞蛋白中表達(dá)上調(diào)，小鼠絲切蛋白2在N2a細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)。3、采用α烯醇化酶ELISA試劑盒對貝類樣品進(jìn)行檢測，其檢測結(jié)果與ELISA法檢測結(jié)果相關(guān)性良好，R2=0.8106。
　　結(jié)論:1

5、、麻痹性貝類毒素食物中毒事件的發(fā)生率沿海地區(qū)明顯高于內(nèi)陸地區(qū);時間主要發(fā)生在第二、三季度;造成麻痹性貝類毒素食物中毒的主要食物是織紋螺。2、STX暴露N2a細(xì)胞可以使細(xì)胞中小鼠14-3-3蛋白和小鼠α烯醇化酶的表達(dá)上調(diào)，小鼠絲切蛋白2的表達(dá)下調(diào)。3、小鼠α烯醇化酶含量與STX濃度在1-10nmol/L范圍內(nèi)具有線性關(guān)系。在此基礎(chǔ)上建立的PSP細(xì)胞檢測法具有良好的特異性及重復(fù)性，檢測限可達(dá)到1nmol/L，相當(dāng)于0.299μg/100g。