茵梔黃中藥成分的UDP-葡醛酸轉(zhuǎn)移酶體外代謝譜分析.pdf

1、茵桅黃復(fù)方具有清熱解毒、退黃降酶的作用，臨床用于新生兒黃疸、急慢性肝炎和其他重癥肝炎等的治療，效果顯著;但近年來頻頻出現(xiàn)的藥物過敏反應(yīng)使得茵梔黃尤其是其注射液的應(yīng)用受到限制。中藥藥效物質(zhì)大多需經(jīng)藥物代謝酶催化轉(zhuǎn)化，同時(shí)可能對藥物代謝酶產(chǎn)生抑制或誘導(dǎo)作用，從而產(chǎn)生藥物之間的代謝相互作用。尿苷二磷酸葡醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGTs)位于細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔，是人體中最重要的Ⅱ相藥物代謝酶。它們能夠催化尿苷-5'-二磷酸葡醛酸(UDPGA)與多種親脂性底物結(jié)合

2、，該結(jié)合反應(yīng)是多種外源物和內(nèi)源物排出體外的重要途徑?；诒緦?shí)驗(yàn)室先前建立的茵梔黃中藥指紋圖譜，化學(xué)成分苯丙素類、黃酮及其苷類、蒽醌類、環(huán)烯醚萜苷類等天然產(chǎn)物可能影響著生物體內(nèi)UGTs的代謝反應(yīng)。因此從藥物代謝譜分析的角度研究茵梔黃中藥成分與UGTs的相互作用對于探討茵梔黃中藥制劑安全性問題具有一定的方法學(xué)意義。本文運(yùn)用體外代謝孵育體系探究了茵梔黃重要活性成分與UGT多種亞型酶的相互作用，主要研究內(nèi)容包括:
　　1)分別選取9種探針

3、底物雌二醇、鵝去氧膽酸、三氟拉嗪、5-羥色胺、丙泊酚、齊多夫定、尼古丁、S-奧沙西泮、睪酮，運(yùn)用LC-MS/MS技術(shù)建立了一個(gè)能同時(shí)評價(jià)人肝微粒體中9種UGT亞型酶UGT1A1、1A3、1A4、1A6、1A9、2B7、2B10、2B15和2B17的活性分析方法。建立并驗(yàn)證了一針進(jìn)樣多組分同時(shí)定量的色譜分析方法;此外發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)方法以底物的質(zhì)譜響應(yīng)來定量相應(yīng)的代謝物是不可行的。
　　2)通過優(yōu)化體外孵育條件，包括丙甲甘肽、單內(nèi)酯、氯化鎂

4、以及緩沖溶液的pH，建立UGT活性篩選與評價(jià)體系，考察了茵梔黃中11種組分（京尼平苷酸、綠原酸、表兒茶素、梔子苷、木犀草苷、槲皮素、漢黃芩苷、濱蒿內(nèi)酯、大黃素、大黃酚）對9種UGT亞型酶介導(dǎo)的Ⅱ相藥物代謝的抑制作用，發(fā)現(xiàn)表兒茶素、槲皮素、漢黃芩苷具有明顯的抑制作用，進(jìn)一步確認(rèn)槲皮素和漢黃芩苷分別對UGT1A4和UGT1A1產(chǎn)生非競爭性抑制，抑制參數(shù)Ki分別為11.6和59.8μM。
　　3)考察人肝微粒體中葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶對茵梔黃