丹參酮ⅡA調(diào)節(jié)人羊膜上皮WISH細胞水通透性及其機制的研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行了論述：
　　第一部分 丹參酮ⅡA對人羊膜上皮WISH細胞水通透性的影響
　　目的:探討丹參酮ⅡA對人羊膜上皮WISH細胞水通透性的影響。
　　方法:CCK-8方法檢測丹參酮ⅡA對人羊膜上皮WISH細胞增殖活力的影響，倒置顯微鏡下觀察丹參酮ⅡA作用前后細胞大小的變化，電鏡觀察細胞中各細胞器的變化。
　　結(jié)果:檢測不同濃度（0μ mol/L，5μ mol/L，10μ mol/L，50μ mo

2、l/L，100μ mol/L，150μ mol/L，200μ mol/L）丹參酮ⅡA對人羊膜上皮WISH細胞增殖活力的影響，得到IC50濃度為35μ mol/L;應(yīng)用IPP軟件分析細胞人小發(fā)現(xiàn)，與空白對照組相比，35μ mol/L丹參酮ⅡA處理人羊膜上皮WISH細胞24h，細胞明顯變大，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;電鏡下觀察到:與空白對照組相比，35μ mol/L丹參酮ⅡA孵育人羊膜上皮WISH細胞24h，細胞腫脹，細胞膜微絨毛水

3、腫增粗，包膜界限欠清晰;細胞胞質(zhì)由致密變疏松，出現(xiàn)部分溶解現(xiàn)象，同時核糖體增加;細胞核膜水腫，間隙增大，線粒體腫脹，出現(xiàn)空泡，由致密變疏松;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張變圓變大，空泡增多，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變光滑，部分脫顆粒現(xiàn)象。
　　結(jié)論:丹參酮ⅡA增加了人羊膜上皮WISH細胞對水的通透性。
　　第二部分 丹參酮ⅡA調(diào)節(jié)人羊膜上皮WISH細胞中水通道蛋白表達的研究
　　目的:探討AQP1、AQP3、AQP8、AQP9在人羊膜上皮WISH細胞的

4、表達，探討丹參酮]ⅡA對人羊膜上皮WISH細胞中AQP1、AQP3、AQP8、AQP9表達的影響。
　　方法:免疫細胞化學(xué)染色方法檢測人羊膜上皮WISH細胞中AQPs的定位，免疫印跡方法檢測細胞中AQP1、AQP3、AQP8、AQP9蛋白的表達。檢測不同濃度(0μ mol/L，5μ mol/L，20μ mol/L，35μ mol/L，50μ mol/L，65μ mol/L)丹參酮ⅡA作用不同時間(0h，6h，12h，24h，48h

5、)人羊膜上皮WISH細胞中AQP1、AQP3、AQP8、AQP9蛋白表達的變化。
　　結(jié)果:免疫細胞化學(xué)染色結(jié)果顯示AQP1、AQP3、AQP8、AQP9主要表達在人羊膜上皮WISH細胞的胞漿中。丹參酮Ⅱ A上調(diào)了人羊膜上皮WISH細胞中AQP1、AQP3、AQP8、AQP9蛋白的表達，上調(diào)AQP1、AQP3蛋白表達最顯著的丹參酮ⅡA濃度是35μ mol/L，上調(diào)AQP8、AQP9蛋白表達最顯著的丹參酮ⅡA濃度是5μ mol/L，

6、35μ mol/L的丹參酮ⅡA上調(diào)AQP1、AQP3蛋白表達最顯著時間為24h，5μ mol/L的丹參酮ⅡA上調(diào)AQP8、AQP9表達最顯著的時間為24h。
　　結(jié)論:丹參酮ⅡA上調(diào)了人羊膜上皮WISH細胞中 AQP1、AQP3、AQP8、AQP9蛋白的表達，不同濃度的丹參酮ⅡA上調(diào)的水通道蛋白不同，在不同時間點上調(diào)的水通道蛋白也不同，四種水通道蛋白之間可能存在相互代償。
　　第三部分 丹參酮ⅡA調(diào)節(jié)人羊膜上皮WISH細胞中

7、AQPs表達的MAPK相關(guān)信號通路研究
　　目的:探討丹參酮ⅡA調(diào)節(jié)人羊膜上皮WISH細胞中AQPs表達的MAPK相關(guān)信號通路。
　　方法:35μ mol/L和5μ mol/L丹參酮ⅡA作用人羊膜上皮WISH細胞24h，通過MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抗體芯片，篩查相關(guān)的MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白。應(yīng)用siRNA干擾技術(shù)和抑制劑下調(diào)得到的相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白，將細胞分成四組:空白對照組;siRNA組（抑制劑組）;丹參酮ⅡA組;siRN

8、A（抑制劑）+丹參酮ⅡA組，應(yīng)用免疫印跡方法檢測AQP1、AQP3、AQP8、AQP9及MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白的表達，觀察該通路對丹參酮ⅡA調(diào)節(jié)人羊膜上皮WISH細胞中AQP1、AQP3、AQP8、AQP9蛋白表達的影響。
　　結(jié)果:通過MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抗體芯片檢測，篩查出丹參酮ⅡA作用細胞相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白為糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)。應(yīng)用GSK3β-siRNA、GSK-3β的抑制劑LiCl進一步證實丹參酮Ⅱ