自噬與模式識別受體在小鼠Sertoli細(xì)胞及附睪上皮細(xì)胞天然抗病毒反應(yīng)中的功能.pdf

1、背景與目的:睪丸與附睪會受到多種病原體（細(xì)菌、病毒、真菌和寄生蟲）的感染，損傷男性生育。組織特異細(xì)胞具有抵御病原體的天然防御功能，其調(diào)節(jié)機(jī)制有待研究。Sertoli細(xì)胞中的模式識別受體Toll樣受體3(TLR3)可以啟動天然抗病毒反應(yīng)。自噬可以直接清除病原體，也可以調(diào)節(jié)天然免疫。本論文旨在分析Sertoli細(xì)胞中自噬和TLR3信號通路的相互調(diào)節(jié)機(jī)制，以及附睪上皮細(xì)胞(EEC)的天然抗病毒機(jī)制。
　　材料與方法:利用TLR3敲除小鼠

2、為模型、結(jié)合RNA干擾技術(shù)研究相關(guān)基因的功能。通過Real-time qRT-PCR定量分析基因mRNA的表達(dá)水平;利用Western blot和免疫組化研究蛋白的表達(dá)及定位;利用ELISA來測定細(xì)胞因子濃度;利用poly(I:C)轉(zhuǎn)染細(xì)胞和小鼠，模擬病毒感染;利用雷帕霉素(Rap)和巴弗洛霉素(Baf-A1)調(diào)節(jié)自噬。
　　結(jié)果:兩個重要的自噬調(diào)節(jié)基因beclin-1和LC3在Sertoli細(xì)胞中高表達(dá);在受到配體poly(I:

3、C)刺激之后，野生型小鼠Sertoli細(xì)胞中的免疫調(diào)節(jié)因子IFN-β以及抗病毒蛋白ISG15、OAS1和MX1的表達(dá)水平明顯升高，但TLR3敲除之后這些因子和蛋白的表達(dá)受到抑制;干擾素調(diào)節(jié)因子3(IRF3)參與poly(I:C)誘導(dǎo)的Sertoli細(xì)胞的天然抗病毒反應(yīng);Poly(I:C)轉(zhuǎn)染能促進(jìn)Sertoli細(xì)胞的自噬;自噬能促進(jìn)抗病毒應(yīng)答。附睪上皮細(xì)胞表達(dá)TLR3和RIG-I，并可被poly(I:C)激活，啟動抗病毒反應(yīng)。