GDNF-RET信號(hào)調(diào)控Hedgehog信號(hào)通路及其在腫瘤生物學(xué)行為中的意義研究.pdf

1、大量研究表明，原癌基因RET和Hedgehog(Hh)信號(hào)通路的異常表達(dá)均與發(fā)育和腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但RET是否調(diào)控Hh通路卻鮮有報(bào)道?；谝陨弦蓡?wèn)，本研究首先借助Hh靶基因Gli-1的雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)內(nèi)源表達(dá)RET的成神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SH-SY5Y經(jīng)RET蛋白激活物膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（Glia1 cell-line derived neurotrophic factor, GDNF）處理，Gli-1報(bào)告基因的

2、活性增加。進(jìn)一步在293T細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞中共轉(zhuǎn)RET過(guò)表達(dá)質(zhì)粒和Gli-1報(bào)告基因質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)在這兩種細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)RET均可增加Gli-1報(bào)告基因活性，證實(shí)RET參與調(diào)控Hh通路。過(guò)表達(dá)RET下游分子Akt的激活形式可增加Gli-1報(bào)告基因活性。而使用MK-2206抑制Akt活性或慢病毒敲降A(chǔ)kt后，激活RET并不能上調(diào)Gli-1的mRNA水平，證實(shí)RET通過(guò)Akt調(diào)控Hh通路。進(jìn)一步，為研究Hh通路中的那個(gè)分子是RET調(diào)控的

3、靶點(diǎn)，我們利用Cyclopamine特異性抑制該通路的關(guān)鍵分子Smoothened(SMO)的活性，發(fā)現(xiàn)激活RET依然能增加Gli-1的mRNA水平，提示RET可能作用于膜受體SMO的下游。通過(guò)對(duì)SMO下游相關(guān)分子PKA、GSK3β、CK1的磷酸化水平檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)激活RET或Akt能降低GSK3β的磷酸化。因GSK3β負(fù)向調(diào)控Hh通路，抑制GSK3β則可激活Hh通路，且該作用不受MK-2206或RET敲降影響，提示RET/Akt可通過(guò)抑制